[发明专利]从红曲霉发酵液中提取分离粗多糖的方法

说明书

本发明属于微生物技术领域，具体的涉及一种从红曲霉发酵液中提取分离粗多糖的方法。将红曲霉发酵液抽滤除去菌丝体和不溶物，得到的滤液减压，加入乙酸乙酯萃取，然后除去乙酸乙酯层；向得到的水层中加入粉末状活性炭，磁力搅拌，然后抽滤除去；滤液经减压浓缩，然后将其透析；将浓缩液倒入乙醇溶液中，于1‑5℃下放置，使其沉淀；离心得沉淀部分，洗涤烘干，得多糖粗品；将多糖粗品配制成浓度为5‑6％的溶液，加入Sevag溶液，漩涡震荡，然后离心；将上层多糖溶液离心除去不溶物，减压浓缩冷冻干燥，即得到粗多糖。本发明所述的从红曲霉发酵液中提取分离粗多糖的方法，提取的胞外多糖的收率及纯度高，且不会破坏胞外多糖的活性。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体的涉及一种从红曲霉发酵液中提取分离粗多糖的方法。

背景技术

红曲霉作为常见的丝状真菌，广泛分布于自然环境中，其能在26-42℃温度范围内生长，32-35℃之间为最适生长温度。红曲霉所能利用的碳源与氮源也较为常见，其可以利用常见的农副产品作为发酵基质。

红曲霉菌具有产生胞外多糖的能力，并且该多糖是由十个以上的单糖以糖苷键连接而成的高分子聚合物，具有明显的生物学活性，例如：抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、免疫调节等方面，此外，还有放射保护、保肝解毒作用等。其最重要的免疫调节活性，广泛用于免疫缺陷疾病及肿瘤疾病的临床治疗及医药领域，己成为分子生物学、医药学的研究热点。红曲霉深层液体发酵的发酵液中含有大量多糖，经离心、醇沉得到的粗多糖和生物量在研究领域有着广泛意义。

目前，对红曲霉发酵液胞外多糖的提取回收研发较少，现有的提取方法工艺繁琐，回收率低，因此，有必要探索一种新型的从红曲霉发酵液中提取分离粗多糖的方法。

发明内容

本发明的目的是：提供一种从红曲霉发酵液中提取分离粗多糖的方法。该提取方法得率高，设备简单，且不会破坏多糖的活性和结构。

本发明所述的从红曲霉发酵液中提取分离粗多糖的方法，由以下步骤组成：

(1)将红曲霉发酵液抽滤除去菌丝体和不溶物，得到的滤液减压浓缩为原体积的20％-30％，加入等体积的乙酸乙酯萃取，然后除去乙酸乙酯层；

(2)向得到的水层中加入粉末状活性炭，室温下磁力搅拌，然后抽滤除去活性炭粉末；

(3)滤液经减压浓缩至原体积的5％-10％，然后将其透析，将透析完的保留液减压浓缩至原体积的5％-10％，重复透析2-3次；

(4)将浓缩液倒入乙醇溶液中，边倾倒边搅拌使其混合均匀，于1-5℃环境下放置20-24h，使其充分沉淀；

(5)离心得沉淀部分，采用无水乙醇和丙酮分别洗涤沉淀2-3次，将最终获得的沉淀烘干，得多糖粗品；

(6)将多糖粗品配制成浓度为5-6％的溶液，加入Sevag溶液，漩涡震荡，然后离心，吸取上层多糖溶液重复操作至界面无白色胨状物出现为止；

(7)将上层多糖溶液离心除去不溶物，减压浓缩后冷冻干燥，即得到粗多糖。

其中：

步骤(1)中所述的红曲霉发酵液的发酵条件为马铃薯葡萄糖琼脂培养基，配方组成为马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂15-20克以及蒸馏水1000毫升；28℃摇床培养15天。

红曲霉采用中国普通微生物菌种保藏管理中心，编号为CGMCC 3.15547的菌种。

其中，编号为CGMCC 3.15547的菌种，其在中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，菌种的拉丁文名称是：Monascus purpureus。

步骤(1)中所述的采用2-3层滤纸抽滤除去菌丝体和不溶物。