[发明专利]测定血浆中阿比特龙浓度的方法

权利要求书

1.一种测定血浆中阿比特龙浓度的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)标准系列工作溶液的配制：称取阿比特龙于容量瓶中，经甲醇溶解配制成标准对照品储备液；将标准对照品储备液用50％乙腈水溶液稀释，配制成标准系列的阿比特龙工作溶液；

2)标准曲线血浆样本的制备：取标准系列的阿比特龙工作溶液，稀释到空白血浆中，配制成浓度为1～500ng/ml的阿比特龙标准曲线血浆样品；

3)标准曲线回归方程的绘制：取标准曲线血浆样品，加入内标工作溶液，涡旋，加入乙腈沉淀剂沉淀后，涡旋、离心后，进样LC-MS/MS系统，得到色谱图；根据得到的色谱图中色谱峰的峰面积与内标峰面积比计算阿比特龙在血浆中的浓度，制定标准曲线回归方程；

其中，所述LC-MS/MS系统中液相条件如下：

液相条件

色谱柱：Waters XTERRA MS C18；流动相A∶10mM乙酸铵-0.1％甲酸水溶液，流动相B∶0.1％甲酸甲醇溶液；

质谱条件

采用ESI源，离子化方式：电喷雾离子化正离子；监测方式：MRM；极性：正离子；碎裂电压：240V，碰撞能：65V

阿比特龙-d₄(ABTL-d₄)：母离子m/z为354.2，子离子的m/z为159.9；

阿比特龙(ABTL)：母离子m/z为350.2，子离子的m/z为155.9。

2.根据权利要求1所述的测定血浆中阿比特龙浓度的方法，其特征在于，所述标准对照品储备液的浓度为1mg·mL^-1；

所述标准系列的阿比特龙工作溶液的浓度范围为20～10000ng/mL；

所述阿比特龙标准曲线血浆样品的浓度范围为1～500ng/mL；

所述血浆来自比格犬、兔、鼠或人。

3.根据权利要求1所述的测定血浆中阿比特龙浓度的方法，其特征在于，所述标准曲线回归方程的获取过程如下：取标准曲线血浆样品各50μL，加入内标工作溶液20μL，涡旋30s，加入300μL乙腈沉淀剂沉淀后，涡旋3min，离心2490g，4℃，10min；5μL进样LC-MS/MS系统，得到色谱图；根据得到的色谱图中色谱峰的面积计算阿比特龙在血浆中的浓度，制定标准曲线回归方程。

4.根据权利要求1所述的测定血浆中阿比特龙浓度的方法，其特征在于，所述内标工作溶液的配制过程如下：称取阿比特龙-d₄于容量瓶中，经甲醇溶解配制成1mg·mL^-1的阿比特龙-d₄内标对照品储备溶液；

将阿比特龙-d₄内标对照品储备溶液用甲醇稀释，得浓度为100ng·mL^-1的内标工作液。