[发明专利]测定血浆中阿比特龙浓度的方法

说明书

本发明属于医药检测技术领域，具体公开了一种测定血浆中阿比特龙浓度的方法，通过LC‑MS/MS法对血浆中阿比特龙的浓度进行测定分析，采用氘代阿比特龙作为内标，采用Waters XTERRA MS C18柱洗脱，ESI串联质谱检测，使得本发明方法的提取回收率大于99％，基质效应、高血脂基质效应和溶血基质效应均无干扰，准确度和精密度高，用量小；相比现有测试方法以高效液相色谱法为主，本发明方法的检测下限能满足较小给药量时生物体内的含量测定的要求，检测过程中信噪比符合标准要求，无杂质峰的干扰，测定的阿比特龙的含量准确度高。

技术领域

本发明涉及医药检测技术领域，具体涉及一种测定血浆中阿比特龙浓度的方法。

背景技术

阿比特龙是一种抗雄激素药物，为雄激素代谢过程中的CYP17酶抑制剂，属于内分泌治疗范畴，该药物通过阻断雄激素生物合成的关键酶降低睾酮水平，除了睾丸、肾上腺来源的睾酮外，还可以降低前列腺肿瘤内部微环境中的雄激素合成。阿比特龙可以强烈抑制17α-羟化酶/C17,20-裂解酶(CYP17)，从而显著抑制雄激素的生物合成，在小鼠的药物代谢动力学模型中阿比特龙对于CYP17的抑制活性远远超过酮康唑。I期临床试验结果表明，阿比特龙在去势环境下不仅可以很好地抑制睾酮水平，而且具有很好的耐受性，也没有表现出像酮康唑一样的毒性反应。开放、单中心和剂量递增的临床试验表明持续阿比特龙治疗可以使50％～57％的患者血清中前列腺癌特异抗原降低，且II期临床推荐治疗剂量为1000mg/d，在此剂量下可同时抑制糖皮质激素和雄激素的合成。阿比特龙化学结构式如下所示。

目前，关于阿比特龙在比格犬血浆中的定量检测与分析，尚未有国内外相关文献报道。

专利申请号CN201710159438.8公开了一种全血中阿比特龙的定量检测方法，以全血作为待测对象，依次进行以下步骤：在全血裂解液中加入乙酸乙酯振荡漩涡后离心，乙酸乙酯层氮气流吹干后用20％乙腈水溶液复溶后离心，吸取上清液Ⅰ；称取碱性硅藻土放入玻璃层析柱中，振动处理，然后加入上清液Ⅰ依次用纯水、20％甲醇水溶液、色谱甲醇洗脱，洗脱液氮气流吹干后用20％乙腈水溶液复溶后离心，吸取上清液Ⅱ进行高效液相色谱系统分析，得阿比特龙药物峰面积Y，代入公式Y＝27524X+1956.6，X为上清液Ⅱ的阿比特龙浓度；然后经换算，得待测全血中的阿比特龙浓度。

西南交通大学制药工程学院吴青松等开展了乙酸阿比特龙酯的合成及其质量检测研究，其采用Luna C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，流速1.0ml/min，检测波长220nm，柱温40℃，流动相A相为甲醇-乙腈(80％-20％)、流动相B相为水，梯度洗脱，定量分析了乙酸阿比特龙酯和作为杂质存在的阿比特龙的含量。

国外期刊报道了印度Kumar等采用RP-HPLC方法定量分析了大鼠血浆中阿比特龙，其采用Betasil C18色谱柱，利用乙酸乙酯萃取，室温环境下定量检测了大鼠血浆中阿比特龙含量。其回收率为70％以上，流动相为乙腈-水-0.01M磷酸二氢钾(pH3.0)＝55-5-40(V/V/V)。

目前以高效液相色谱法为主，检测下限不能满足较小给药量时生物体内的含量测定的要求，检测过程中信噪比低，存在溶剂峰的干扰，测定的阿比特龙的含量准确度不足，因此，能够用一种方法解决上述问题具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种测定血浆中阿比特龙浓度的方法，克服现有技术中的检测方法无法检测血浆中较低浓度水平的精准定量检测的缺陷；本发明的方法样本预处理过程简化，避免基质效应，色谱峰形极佳，实现了对血浆中药物快速、灵敏、特异性分析，为体内药代动力学的检测提供了简便的分析方法，实现在血浆中较低浓度水平的精准定量；能够满足大批量临床样品分析的需求。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一方面，本发明提供一种测定血浆中阿比特龙浓度的方法，包括如下步骤：