[发明专利]一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法

权利要求书

1.一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、在生长温度条件下培养大肠杆菌，所述生长温度为30-37℃；

步骤2、待细胞密度在OD₆₀₀条件下达到40±5℃时，转为诱导温度下培养大肠杆菌，所述诱导温度为20-35℃，所述诱导温度低于所述生长温度；

步骤3、在诱导温度下培养0.5-2 h后加入诱导剂进行诱导；

所述步骤1中，首先采用基础培养基培养大肠杆菌，待反应器中甘油耗尽，溶解氧浓度上升并达到峰值时，添加补料培养基，补料速度为1-10 mL/h·L（每升培养基每小时流加1-10 mL补料培养基）；

所述基础培养基包括酵母蛋白胨5-15 g/L，酵母浸出物10-25 g/L，甘油5-10 g/L，磷酸二氢钾1.3-2.0 g/L，磷酸氢二钾4.5-8.0 g/L，氯化钙0.1-0.3 g/L，氯化镁1-4 g/L，氯化钴0.002-0.01 g/L，硫酸铁0.15-0.5 g/L，硫酸锌0.02-0.05 g/L，钼酸钠0.01 g/L；

所述补料培养基包括甘油10-300 g/L，硫酸铵5-10 g/L，氯化铵5-10 g/L。

2.根据权利要求1所述的一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，其特征在于：所述基础培养基、所述补料培养基中的甘油由半乳糖、乳糖、麦芽糖、木糖中的一种以上替代，或者，甘油由甘油、半乳糖、乳糖、麦芽糖、木糖中的两种以上替代。

3.根据权利要求1所述的一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，其特征在于：所述诱导剂包括但不限于IPTG、乳糖、阿拉伯糖、色氨酸。

4.根据权利要求1所述的一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，其特征在于：所述重组蛋白包括但不限于VLP（病毒样颗粒）、抗体、多肽、酶制剂。

5.根据权利要求1所述的一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，其特征在于：所述大肠杆菌为自然筛选菌种或基因改造后的工程菌，包括但不限于BL21、W3110、DH5α。