[发明专利]一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法

说明书

本发明提供了一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，其能通过对发酵方法的各工艺步骤、参数条件以及培养基配制进行综合优化，以提高外源蛋白的表达水平。一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、在生长温度条件下培养大肠杆菌，生长温度为30‑37℃；步骤2、待细胞密度在OD₆₀₀条件下达到40±5℃时，转为诱导温度下培养大肠杆菌，诱导温度为20‑35℃，诱导温度低于生长温度；步骤3、在诱导温度下培养0.5‑2 h后加入诱导剂进行诱导。采用本发明方法的表达调控，可有效地延长大肠杆菌培养周期，提高大肠杆菌的细胞密度，同时实现较高的蛋白表达量。

技术领域

本专利涉及蛋白异源表达技术领域，具体涉及一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法。

背景技术

基于大肠杆菌的原核蛋白表达系统既是最常用的表达系统，也是最经济实惠的蛋白表达系统。大肠杆菌表达系统为代表，具有遗传背景清楚、成本低、表达产物分离纯化相对简单等优点。目前大肠杆菌表达体系主要通过大肠杆菌菌株的自然筛选或基因改造、载体构建或元件优化以提高外源蛋白的表达水平，但对大肠杆菌发酵培养方法的优化控制却鲜有提及，因此，提供一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，通过对发酵方法的各工艺步骤、参数条件以及培养基配制进行综合优化，以提高外源蛋白的表达水平，是本领域技术人员亟待解决的问题。

发明内容

本发明提供了一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，其能通过对发酵方法的各工艺步骤、参数条件以及培养基配制进行综合优化，以提高外源蛋白的表达水平。

其技术方案是这样的，一种采用大肠杆菌体系诱导表达重组蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、在生长温度条件下培养大肠杆菌(转化有重组蛋白相应载体的大肠杆菌)，所述生长温度为30-37℃；

步骤2、待细胞密度在OD₆₀₀条件下达到40±5时，转为诱导温度下培养大肠杆菌，所述诱导温度为20-35℃，所述诱导温度低于所述生长温度；

步骤3、在诱导温度下培养0.5-2 h后加入诱导剂进行诱导；

所述步骤1中，首先采用基础培养基培养大肠杆菌，待反应器中甘油耗尽，溶解氧浓度上升并达到峰值时，添加补料培养基，补料速度为1-10 mL/(h·L)（每升培养基每小时流加1-10 mL补料培养基）；

所述基础培养基包括酵母蛋白胨5-15 g/L，酵母浸出物10-25 g/L，甘油5-10 g/L，磷酸二氢钾1.3-2.0 g/L，磷酸氢二钾4.5-8.0 g/L，氯化钙0.1-0.3 g/L，氯化镁1-4 g/L，氯化钴0.002-0.01 g/L，硫酸铁0.15-0.5 g/L，硫酸锌0.02-0.05 g/L，钼酸钠0.01 g/L；

所述补料培养基包括甘油10-300 g/L，硫酸铵5-10 g/L，氯化铵5-10 g/L。

进一步的，所述基础培养基、所述补料培养基中的甘油由半乳糖、乳糖、麦芽糖、木糖中的一种以上替代，或者，甘油由甘油、半乳糖、乳糖、麦芽糖、木糖中的两种以上替代。

进一步的，所述诱导剂包括但不限于IPTG、乳糖、阿拉伯糖、色氨酸。

进一步的，所述重组蛋白包括但不限于VLP（病毒样颗粒）、抗体、多肽、酶制剂。

进一步的，所述大肠杆菌为自然筛选菌种或基因改造后的工程菌，包括但不限于BL21、W3110、DH5α。