[发明专利]一种快速鉴定转基因耐除草剂大豆ZH10-6转化体特异性的方法在审
| 申请号： | 202010972526.1 | 申请日： | 2020-09-16 |
| 公开（公告）号： | CN112029892A | 公开（公告）日： | 2020-12-04 |
| 发明（设计）人： | 赵新;王一衡;李瑞环;尉万聪;兰青阔;王永 | 申请（专利权）人： | 天津市农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 天津市杰盈专利代理有限公司 12207 | 代理人： | 朱红星 |
| 地址： | 300381 天津市西青区*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 鉴定 转基因 除草剂 大豆 zh10 转化 特异性 方法 | ||
1.一种快速鉴定转基因耐除草剂大豆ZH10-6转化体特异性的引物，其特征在于包括ZH10A（边界A）：
引物正向序列：5’-GAGCCTCGGATGGGATTGAT-3’
反向引物序列：5’-TCGCTCATGTGTTGAGCATATAA-3’
ZH10B（边界B）：
引物正向序列：5’-GTCGTGACTGGGAAAACCCT-3’
反向引物序列：5’- ATTCTAAAACGCTTTCTTCTTGCTA-3’
ZH10C（边界C）：
引物正向序列：5’- CTAAACCTCTTAATGATACGGCTT-3’
反向引物序列：5’- TCGTGACTGGGAAAACCCT-3’
ZH10D（边界D）
引物正向序列：5’- ACCCTTGTTGAACGAGTGG-3’
反向引物序列：5’- AGAAGAGTATTCGGGAAGCTAA -3’。
2.一种采用权利要求1所述的快速鉴定转基因耐除草剂大豆ZH10-6转化体特异性的引物快速鉴定的方法，其特征在于它按如下步骤进行：
（1）用于鉴定转基因耐草甘膦大豆ZH10-6新品种的分子特征转化体特异性引物，其特征在于，包括ZH10A（边界A）引物正向序列：5’-GAGCCTCGGATGGGATTGAT-3’，反向引物序列：5’-TCGCTCATGTGTTGAGCATATAA-3’； ZH10B（边界B）引物正向序列：5’-GTCGTGACTGGGAAAACCCT-3’，反向引物序列：5’- ATTCTAAAACGCTTTCTTCTTGCTA-3’； ZH10C（边界C）引物正向序列：5’- CTAAACCTCTTAATGATACGGCTT-3’，反向引物序列：5’-TCGTGACTGGGAAAACCCT-3’； ZH10D（边界D）引物正向序列：5’- ACCCTTGTTGAACGAGTGG-3’，反向引物序列：5’- AGAAGAGTATTCGGGAAGCTAA -3’；
（2）五重PCR反应体系为20 μL，包括：2×Green Mix(含缓冲液、dNTPs、 2+)10 μL，8.5 μL引物预混液，1.0 μL DNA样品，0.5 μL灭菌超纯水补足20 μL；
引物预混液8.5 μL，包括：ZH10A-4F/ ZH10A-2终浓度10 μM各1.5 μL，ZH10B-1/ZH10B-2终浓度10 μM各0.75 μL，ZH10C-1/ ZH10C-2终浓度5μM各0.5 μL，ZH10D-3F/ZH10D-2终浓度5 μM各1 μL，Lectin基因终浓度2 μM各0.5 μL；
（3）扩增程序：94℃预变性5 min； 94℃变性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸60 s，35个循环；72℃延伸7 min；取7μL PCR扩增产物，用2%琼脂糖凝胶电泳进行检测分析。
3.权利要求1所述的快速鉴定转基因耐除草剂大豆ZH10-6转化体特异性的引物在用于ZH10-6插入位点快速高效筛查方面的应用。
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