[发明专利]一种无血清骨髓培养基及其制备方法和应用

说明书

本发明提出了一种无血清骨髓培养基及其制备方法和应用。该培养基包括基础培养基以及加入其中的L‑抗坏血酸、维生素E、青霉素、链霉素、丙酮酸钠、亚硒酸钠、谷氨酰胺、rhIL‑2、CpG寡聚核苷酸、亚油酸、亚麻酸、硬脂酸、BSA、甘油磷酸钠、HEPES、NaH₂PO₄、Na₂HPO₄、rhu‑EPO培养的人类淋巴细胞培养上清。本发明便于批次之间的质量控制；采用rhu‑EPO培养的人类淋巴细胞培养上清提供骨髓生长需要的生长因子，降低生产成本；采用甘油磷酸钠等作为pH缓冲系统，其pH值更稳定，保存过程中pH值稳定。采用rhIL‑2、CpG寡聚核苷酸刺激B细胞活性，用于核型分析时获得更多的核型。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，尤其涉及一种无血清骨髓培养基及其制备方法和应用。

背景技术

染色体畸变与血液系统疾病具有紧密的相关性。近年来，随着细胞培养和染色体显带等技术的发展，细胞遗传学成为血液系统疾病分析、研究中不可缺少的重要内容。骨髓染色体核型分析用于血液系统疾病的诊断、治疗、预后、发病机制研究具有非常重要的作用。然而，骨髓染色体核型制备过程复杂，影响因素多，成功率低且成本高，获得的分裂相少，染色体粗短，而且分散不好。

传统的骨髓培养基由RPMI1640基础培养基、胎牛血清、抗生素、碳酸氢钠等组成；为了提高骨髓培养基的效果，近年来，已有一些骨髓培养基；例如程建兵、夏成青、陈红梅等采用RPMI1640基础培养基、青霉素/链霉素、胎牛血清和人类淋巴瘤细胞培养物配置骨髓培养基；谷超采用基础培养基、青霉素、链霉素、胎牛血清、人类淋巴瘤细胞培养物和化合物Cephaloziellin N配置骨髓培养基；上述两种骨髓培养基培养出的骨髓细胞用于染色体G制片，均取得良好的效果。但是，上述骨髓培养基均含有胎牛血清，成分复杂，易出现真菌、支原体等污染；还有就是血清质量标准不一，这对大批量生产来说，很容易造成培养基质量不稳定，并且价格也较高。此外，上述两种骨髓培养基含有人类淋巴瘤细胞培养物的浓度为60-140ul/ml，浓度较高，用于批量生产，难以获得满足生产所需要的人类淋巴瘤细胞培养物，并且成本也高。

因此，为了降低成本，便于批量生产，质量稳定，建立一种骨髓细胞生长良好，分裂相多且清晰，形态好而且分散度良好的无血清骨髓细胞培养基制备和应用尤为重要。

发明内容

本发明为了克服现有技术的不足，提供一种无血清骨髓培养基，使培养出的骨髓细胞用于G显带染色体核型分析时，背景清晰，染色体分裂相多，形态好且分散度好，易于观察，而且成本低，质量稳定。

此外，本发明还提出了上述无血清骨髓培养基的制备方法和应用。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案予以实现：

一种无血清骨髓培养基，包括基础培养基，以及加入该基础培养基中的L-抗坏血酸、维生素E、青霉素、链霉素、丙酮酸钠、亚硒酸钠、谷氨酰胺、rhIL-2、CpG寡聚核苷酸、亚油酸、亚麻酸、硬脂酸、BSA、甘油磷酸钠、HEPES、NaH₂PO₄、Na₂HPO₄、rhu-EPO培养的人类淋巴细胞培养上清。

作为优选地，所述的基础培养基为RPMI1640培养基。

作为优选地，所述无血清骨髓培养基的各组分的浓度为：