[发明专利]一种氧化葡萄糖酸杆菌中基因抑制的方法有效
| 申请号： | 202010978371.2 | 申请日： | 2020-09-17 |
| 公开（公告）号： | CN112094843B | 公开（公告）日： | 2022-01-11 |
| 发明（设计）人： | 周景文;秦志杰;刘立;陈坚;曾伟主;堵国成 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/63;C12N1/21;C12R1/01 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 林娟 |
| 地址： | 214000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 氧化 葡萄糖 杆菌 基因 抑制 方法 | ||
1.一种抑制氧化葡萄糖酸杆菌中基因表达的元件，其特征在于，所述元件由crRNA、表达crRNA的启动子和表达载体组成；所述表达载体为p2-5载体，p2-5载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述启动子为pAtse，pAtse的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；以目的基因的spacer序列及其两端的重复序列作为crRNA，所述spacer序列为目的基因PAM序列为AAG的合适位点的32bp序列。
2.根据权利要求1所述的元件，其特征在于，所述表达crRNA的启动子为任意能够在氧化葡萄糖酸杆菌中表达的启动子。
3.一种抑制氧化葡萄糖酸杆菌中基因表达的方法，其特征在于，将权利要求1或2所述的元件转入氧化葡萄糖酸杆菌细胞中得到重组菌，将重组菌培养，实现对氧化葡萄糖酸杆菌中基因的抑制。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述氧化葡萄糖酸杆菌为氧化葡萄糖酸杆菌WSH-003。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述基因包括红色荧光蛋白、edd和gnd。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述edd基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述gnd基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)选取目的基因的spacer序列；
(2)将spacer序列与表达载体连接，获得最终表达载体；
(3)将最终表达载体转化至氧化葡萄糖酸杆菌中。
8.权利要求1或2所述元件，或权利要求3～7任一所述方法在氧化葡萄糖酸杆菌中抑制基因表达的应用。
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