[发明专利]一种基于外泌体富集芯片的外泌体分离富集方法

权利要求书

1.一种基于外泌体富集芯片的外泌体分离富集方法，其特征在于：该方法基于壳聚糖正负电荷吸附原理的外泌体富集芯片，分离富集体液或培养基中外泌体。

2.根据权利要求1所述基于外泌体富集芯片的外泌体分离富集方法，其特征在于：所述体液包括血液、尿液、唾液、乳汁、羊水等多种生物液体。

3.根据权利要求1所述基于外泌体富集芯片的外泌体分离富集方法，其特征在于：所述基于壳聚糖正负电荷吸附原理的外泌体富集芯片由上下两层芯片组成，其中：上层为直通道液路层，下层为三角柱混流液路层；

所述直通道液路层设置有下述结构：

——进样口：位于整个直通道液路层最上游；

——直通道区：布置在进样口和出口之间用于沟通两者；

——样品出口：位于整个直通道液路层最下游；

所述三角柱混流液路层位于直通道液路层正下方，三角柱混流液路和直通道区液路重合。

4.按照权利要求1所述基于外泌体富集芯片的外泌体分离富集方法，其特征在于：所述基于壳聚糖正负电荷吸附原理的外泌体富集芯片还满足下述要求之一或其组合：

其一，所述直通道液路层和三角柱混流液路层的材料均为聚二甲基硅氧烷聚合物，直通道液路层和三角柱混流液路层厚度相同，均为1-5mm；

其二，所述直通道液路层和三角柱混流液路层通道高度均为100-1000μm；

其三，所述直通道液路层和三角柱混流液路层通道宽度相同，均为0.1-1cm；

其四，所述直通道液路层和三角柱混流液路层通道长度相同，均为1-5cm；

其五，所述三角柱为“Y”形三角柱，三角柱尺寸为10-200μm。

5.按照权利要求1所述基于外泌体富集芯片的外泌体分离富集方法，其特征在于：所述基于壳聚糖正负电荷吸附原理的外泌体富集芯片还满足下述要求：

所述直通道液路层是在制作成功的直通道液路层模板上浇上一层高于模板1-5mm的聚二甲基硅氧烷，固化后揭下得到；所述三角柱混流液路层是在制作成功的三角柱混流液路模板上浇上一层高于模板1-5mm的聚二甲基硅氧烷，固化后揭下得到；所述进样口和样品出口由直径0.5-1mm的打孔器打孔所得；所述直通道液路层有结构一侧和三角柱混流液路层有结构的一侧通过氧等离子体封接到一起。

6.按照权利要求1所述基于外泌体富集芯片的外泌体分离富集方法，其特征在于：先通过进样口在通道中注入0.1％-2％的壳聚糖水溶液，4摄氏度放置4-24h后，用去离子水冲洗去通道中多余的壳聚糖水溶液，得到基于壳聚糖正负电荷吸附原理的外泌体富集芯片。

7.按照权利要求1所述基于外泌体富集芯片的外泌体分离富集方法，其特征在于：该方法基于壳聚糖正负电荷吸附原理的外泌体富集芯片，方法步骤如下：

(1)取出待分离样品10-100μL，和pH为5-6的MES(2-(N-吗啉代)乙磺酸)缓冲液混合，备用；

(2)使用注射器吸取待分离样本，并利用循环注射泵将样本从进样口注入到芯片中，在样品出口插一个100μL以上的黄色枪头以防止样品溢出，根据待分离样品体积设置循环注射泵的速率，每分钟循环0.5-2次，持续时间为10-30min；

(3)注射结束后使用MES冲洗通道1-3次除去多余样品；

(4)使用真空泵抽去通道中多余液体；

(5)使用移液枪将pH为8-9的Tris-Hcl(三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸)缓冲液从进样口注入到通道中，静置5-10min后从样品出口吸出，即得分离好的外泌体品。