[发明专利]一种新型冠状病毒荧光qRT-PCR法快速检测体系

说明书

本发明涉及一种新型冠状病毒荧光qRT‑PCR法快速检测体系，通过优化靶向新型冠状病毒ORF1ab基因、N基因的引物探针及扩增体系的酶混合液(逆转录酶、DNA聚合酶和UNG酶)、镁离子浓度等，实现了扩增体系和扩增程序的优化，进而使扩增时间缩短至30min内，极大的缩短了检测时间，同时保证了对新型冠状病毒检测的灵敏度、特异性、重复性及准确性。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测技术领域，尤其涉及一种新型冠状病毒荧光qRT-PCR法快速检测体系。

背景技术

2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)属于乙型冠状病毒属病毒，其基因特征与SARS-CoV和MERS-CoV有明显区别。SARS-CoV-2感染后引起的肺炎主要经飞沫、接触传播，人群普遍易感。SARS-CoV-2感染的一般症状有：发热、乏力、干咳，逐渐出现呼吸困难，部分患者起病症状轻微，甚至可无明显发热。严重症状有：急性呼吸窘迫综合征、脓毒性休克、难以纠正的代谢性酸中毒、出凝血功能障碍。除上述症状，还有可能具有如下不典型症状：如轻度纳差、乏力、恶心呕吐、腹泻、头痛等。从目前的收治的病例情况看，多数患者预后良好，少数患者病情危重，甚至与其它基础性疾病并发导致死亡。由于SARS-CoV-2传播性快，易造成大规模流行，因此及时、准确检测新型冠状病毒，对于对疫情监测以及预防具有重要意义。

目前用qRT-PCR检测SARS-CoV-2的核酸检测试剂盒，市面上已有销售，但是检测扩增时长都不少于60min。市售的快速的核酸检测试剂盒(30min)，检测方法均为恒温扩增方法，灵敏度和特异性均达不到qRT-PCR检测方法。因此迫切需要一种能够快速并准确检测新型冠状病毒的试剂盒，且实现良好的灵敏度和特异性。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提出一种新型冠状病毒荧光qRT-PCR法快速检测体系，扩增时间为半小时内，但是对于SARS-CoV-2检测的灵敏度、特异性方面均达到了市售的标准qRT-PCR的检测水平。

为实现以上目的，本发明所采用的技术方案包括：

引物探针组合物，其特征在于，包括选自如下的引物探针组：

用于检测新型冠状病毒ORF1ab基因的引物探针组A，所述引物探针组A包括SEQ IDNO.1所示的正向引物，SEQ ID NO.2所示的反向引物，SEQ ID NO.3所示的探针；

用于检测新型冠状病毒N基因的引物探针组B，所述引物探针组B包括SEQ ID NO.4所示的正向引物，SEQ ID NO.5所示的反向引物，SEQ ID NO.6所示的探针；

用于检测内标的引物探针组C，所述引物探针组C包括SEQ ID NO.7所示的正向引物，SEQ ID NO.8所示的反向引物，SEQ ID NO.9所示的探针。

一种用于新型冠状病毒检测的试剂盒，包括如上所述的引物探针组合物。

进一步地，所述引物探针组A和B的引物在RT-PCR反应体系中的终浓度均为0.8μM，所述引物探针组A和B的探针在RT-PCR反应体系中的终浓度均为0.4μM，所述探针组C的引物在RT-PCR反应体系中的终浓度为0.4μM，所述探针组C的引物在RT-PCR反应体系中的终浓度为0.2μM；所述RT-PCR(Reverse Transcription PCR)反应体系即逆转录PCR反应体系，RT-PCR反应中，首先经逆转录酶作用，RNA链被逆转录成为cDNA，再以所述cDNA为模板，在DNA聚合酶作用下扩增合成目的片段。

进一步地，所述试剂盒还包括Tris缓冲液、镁离子、dA/G/C/UTPs、DNA聚合酶、逆转录酶、Anti-Taq、BSA、UNG酶、RNasin。