[发明专利]板栗体细胞胚发育的同步化方法及组培苗生根方法

权利要求书

1.一种板栗体细胞胚发育的同步化方法，其特征在于，包括以下步骤：

a. 将板栗的胚性愈伤组织接种至E1液体培养基中悬浮培养，筛选保留20-40目的胚性愈伤组织；

b. 将步骤a保留的胚性愈伤组织接种至E2液体培养基中悬浮培养，筛选保留20-40目的球形胚；

c. 将步骤b保留的球形胚在E2液体培养基中继代培养，筛选保留20-40目的心形胚；

d. 将步骤c保留的心形胚在E2液体培养基中继代培养，筛选保留10-20目的鱼雷形胚；

e. 将步骤d保留的鱼雷形胚在E2液体培养基中继代培养，筛选保留10-20目的体细胞胚；

f. 将步骤e保留的体细胚胚在E2液体培养基中继代培养，得到子叶形胚；

所述E1液体培养基为含有生长素和/或细胞分裂素的液体植物培养基；

所述步骤b-f中的E2液体培养基各自独立的为不含生长素或细胞分裂素的液体植物培养基；

所述步骤a-f的培养方式各自独立的为震荡培养；

所述步骤a-f的培养时间各自独立的为6-8天；

所述E1液体培养基的组分为：2.0-2.5 g/L WPM、100-120 mg/L Nitsch NitschVitamins、0.8-1.2 g/L水解酪蛋白、1.5-2.0 µM 2,4-D、0.8-1.5 µM 6-BA和25-35 g/L蔗糖；

所述E2液体培养基的组分为：2.0-2.5 g/L WPM、100-120 mg/L Nitsch NitschVitamins、0.8-1.2 g/L水解酪蛋白、0.3-0.8 g/L谷氨酰胺和55-65 g/L蔗糖。

2.根据权利要求1所述的板栗体细胞胚发育的同步化方法，其特征在于，所述E1液体培养基的组分为：2.3 g/L WPM、109 mg/L Nitsch Nitsch Vitamins、1.0 g/L水解酪蛋白、1.8 µM 2,4-D、1.1 µM 6-BA和30 g/L蔗糖；

所述E2液体培养基的组分为：2.3 g/L WPM、109 mg/L Nitsch Nitsch Vitamins、1.0 g/L水解酪蛋白、0.5 g/L谷氨酰胺和60 g/L蔗糖。

3.根据权利要求1所述的板栗体细胞胚发育的同步化方法，其特征在于，所述步骤a和步骤b中，每0.09-0.11g的胚性愈伤组织各自独立的接种至90-110 mL的液体培养基中。

4.根据权利要求3所述的板栗体细胞胚发育的同步化方法，其特征在于，每0.10 g的胚性愈伤组织各自独立的接种至100 mL的液体培养基中。

5.根据权利要求1所述的板栗体细胞胚发育的同步化方法，其特征在于，所述步骤a-f的培养温度各自独立的为24-26℃；

所述震荡培养的转速为90-110 r/min。

6.根据权利要求5所述的板栗体细胞胚发育的同步化方法，其特征在于，所述步骤a-f的培养温度各自独立的为25℃；

所述震荡培养的转速为100 r/min。

7.根据权利要求1所述的板栗体细胞胚发育的同步化方法，其特征在于，所述步骤a-f的培养时间各自独立的为7天。