[发明专利]板栗体细胞胚发育的同步化方法及组培苗生根方法

说明书

本发明提供了一种板栗体细胞胚发育的同步化方法及组培苗生根方法，涉及植物组织培养技术领域。本发明提供的板栗体细胞胚发育的同步化方法，对胚性愈伤组织进行液体悬浮培养，并对不同发育时期特定体积大小的胚性愈伤组织进行筛选，获得生长状态一致的胚性愈伤组织，并且应用此方法进而得到生长状态一致的球形胚、心形胚、鱼雷形胚和子叶形胚。其中，球形胚的同步率为91.82％，心形胚的同步率为83.92％，鱼雷形胚的同步率为76.69％，子叶形胚的同步率为69.52％，基本实现了板栗体细胞胚发育过程中各个时期的同步化。本发明提供了一种组培苗的生根方法，能够促进组培苗的生根，提高生根率。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其是涉及一种板栗体细胞胚发育的同步化方法及组培苗生根方法。

背景技术

板栗(Castanea Mollissima)是壳斗科栗属植物，是我国重要的生态经济林树种。板栗抗病性强，虫害较少，耐瘠薄，耐干旱，在造林绿化和生态系统服务中发挥重要作用。板栗产量居世界坚果产量之首，具有重要的经济价值，有“干果之王”的美称。

燕山红栗(C.mollissima cv.Yanshanhongli)是我国秦岭以北地区适宜栽植的优良品种之一。燕山红栗具有环境适应性强，结果早，果肉甜糯，含糖量高，外形美观，耐贮藏等特性，是北京板栗主栽品种之一，深受人们的喜爱。因此，板栗优良品种的快速繁殖尤为重要，但是迄今为止，燕山红栗等优良品种的繁殖一直采用嫁接的方法，这种方法无法实现优良品种的大规模无性繁殖。而通过体细胞胚再生可以快速实现板栗优良品种的大量繁殖，目前已初步建立了板栗体细胞胚再生体系，但是现有的板栗体细胞胚再生体系中存在同步率低和生根难的问题。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种板栗体细胞胚发育的同步化方法，以缓解板栗体胚再生过程中体细胞胚发育各个时期同步率低的技术问题。

本发明的第二目的在于提供一种组培苗的生根方法，能够促进组培苗的生根，提高生根率。

为了解决上述技术问题，特采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种板栗体细胞胚发育的同步化方法，包括以下步骤：

a.将板栗的胚性愈伤组织接种至E1液体培养基中悬浮培养，筛选保留20-40目的胚性愈伤组织；

b.将步骤a保留的胚性愈伤组织接种至E2液体培养基中悬浮培养，筛选保留20-40目的球形胚；

c.将步骤b保留的球形胚在E2液体培养基中继代培养，筛选保留20-40目的心形胚；

d.将步骤c保留的心形胚在E2液体培养基中继代培养，筛选保留10-20目的鱼雷形胚；

e.将步骤d保留的鱼雷形胚在E2液体培养基中继代培养，筛选保留10-20目的体细胞胚；

f.将步骤e保留的体细胞胚在E2液体培养基中继代培养，得到子叶形胚；

所述E1液体培养基为含有生长素和/或细胞分裂素的液体植物培养基；

所述步骤b-f中的E2液体培养基各自独立的为不含生长素或细胞分裂素的液体植物培养基。

作为进一步技术方案，所述E1液体培养基的组分包括：2.0-2.5g/L WPM、100-120mg/L NitschNitsch Vitamins、0.8-1.2g/L水解酪蛋白、1.5-2.0μM 2,4-D、0.8-1.5μM6-BA和25-35g/L蔗糖；

优选地，所述E1液体培养基的组分包括：2.3g/L WPM、109mg/L NitschNitschVitamins、1.0g/L水解酪蛋白、1.8μM 2,4-D、1.1μM 6-BA和30g/L蔗糖；