[发明专利]一种同时测定蜜柚中6种糖苷类香气前体的方法

权利要求书

1.一种同时测定蜜柚中6种糖苷类香气前体的方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1） 提取：称取打碎后的蜜柚样品2 g至50 mL离心管中，加入20 mL甲醇，在10000 r/min条件下均质2分钟；然后超声提取20 min，再4500 r/min下离心5 min，上清液转移至另一新的离心管中；上清液通过0.22μm有机膜过滤至进样小瓶，供高效液相色谱----串联质谱仪测定；

（2）配制基质标准工作溶液在甲醇中以1 mg/mL的浓度制备香叶醇β-葡萄糖苷、香叶醇β-樱草糖苷、芳樟醇β-樱草糖苷、苯甲醇β-樱草糖苷、2-苯乙醇β-樱草糖苷和橙花叔醇β-樱草糖苷的储备溶液；将这些储备溶液混合，然后稀释以产生连续校准标准溶液；在甲醇中制备标准混合物，配制至少五个浓度的糖苷系列基质标准工作溶液储备溶液和校准标准溶液在-18℃下保存；

（3）液相色谱-串联质谱法LC-MS/MS测定

定量测定：将步骤(2)中系列基质标准工作液进行LC-MS/MS测定，以基质标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤(1) 中样品液注入LC-MS/MS进行测定，测得样品液中糖苷类化合物的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品液中糖苷类药物含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中糖苷类药物残留量；

定性测定：检测步骤(1)中样品液中目标化合物母离子和子离子对，若其离子色谱峰保留时间与标准工作溶液一致；且样品液中目标化合物的两个子离子的相对丰度与浓度相当，则判断该样品中存在该种目标化合物；若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种目标化合物；所述的6种糖苷类香气前体是香叶醇β-葡萄糖苷、香叶醇β-樱草糖苷、芳樟醇β-樱草糖苷、苯甲醇β-樱草糖苷、2-苯乙醇β-樱草糖苷和橙花叔醇β-樱草糖苷。

2.根据权利要求1所述的一种同时测定蜜柚中6种糖苷类香气前体的方法，其特征在于：质谱检测使用多反应监测扫描模式，香叶醇β-葡萄糖苷的母离子361.1，子离子分别为361.1；香叶醇β-樱草糖苷的母离子493.1，子离子分别为149.1和89.1；芳樟醇β-樱草糖苷的母离子493.1， 子离子分别为315.1和161.1；苯甲醇β-樱草糖苷的母离子447.0,子离子分别为401.1和269.1；2-苯乙醇β-樱草糖苷的母离子461.1,子离子分别为415.1和149.1；橙花叔醇β-樱草糖苷的母离子561.1,子离子分别为515.2和383.2。

3.根据权利要求1所述的一种同时测定蜜柚中6种糖苷类香气前体的方法，其特征在于：液相色谱条件为，色谱柱：Shim-pack GIST C18柱，2.0um，2.1mm×100mm；流速：0.3 mL/min；柱温：40℃；样品盘温度：15℃；进样量：2μL；流动相A为0.1%（V/V）甲酸水溶液，流动相B为乙腈。

4.根据权利要求1所述的一种同时测定蜜柚中6种糖苷类香气前体的方法，其特征在于：梯度洗脱条件为：0 min，10% B；3 min，25% B；9 min，40% B；11 min，90% B；12 min，90%B；12 min，10% B，16 min，10% B。

5.根据权利要求1所述的一种同时测定蜜柚中6种糖苷类香气前体的方法，其特征在于：质谱条件如下：离子源：电喷雾离子源ESI；扫描方式：负离子扫描；检测方式：多反应监测扫描模式；气压电离API气体：氮气纯度95%，压力600-900kpa；碰撞气体：高纯氩；界面电压：3.0 kv；界面温度：300 ℃；脱溶剂温度：250 ℃；干燥气：10 L/min，雾化气：3 L/min，加热气：10 L/min，热块温度：400 ℃。