[发明专利]一种同时测定蜜柚中6种糖苷类香气前体的方法

说明书

本发明公开了一种同时测定蜜柚中香叶醇β‑葡萄糖苷、香叶醇β‑樱草糖苷、芳樟醇β‑樱草糖苷、苯甲醇β‑樱草糖苷、2‑苯乙醇β‑樱草糖苷和橙花叔醇β‑樱草糖苷等6种糖苷类香气前体的UPLC‑MS/MS检测方法，包括提取、净化、配制基质标准工作溶液和采用UPLC‑MS/MS法进行测定步骤。本发明的测定方法能够有效提取蜜柚中的香叶醇β‑葡萄糖苷、香叶醇β‑樱草糖苷、芳樟醇β‑樱草糖苷、苯甲醇β‑樱草糖苷、2‑苯乙醇β‑樱草糖苷和橙花叔醇β‑樱草糖苷等6种糖苷类香气前体，并能进行定性定量测定。该方法快速、准确，灵敏度高，重现性好。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种同时测定柚果中香叶醇β-葡萄糖苷、香叶醇β-樱草糖苷、芳樟醇β-樱草糖苷、苯甲醇β-樱草糖苷、2-苯乙醇β-樱草糖苷和橙花叔醇β-樱草糖苷等6种糖苷类香气前体的UPLC-MS/MS检测方法。

背景技术

植物中的风味化合物实质上是以非挥发性和无味糖配合物的形式存在的，而且在一些植物中发现的糖苷结合芳香化合物的浓度比游离的化合物高出几倍。为了长时间保持香味，许多水果或花卉可以通过糖苷酶的水解从糖苷香味前体中长期释放香气化合物。香叶醇、芳樟醇、橙花叔醇、苯甲醇和2-苯乙醇是各种植物的糖苷类香气前体。

柚子是我国南方广泛种植的柑桔栽培品种。柚子因其芳香可口、有益健康和药用价值而被认为是很有吸引力的水果，并被用作果酱和糖果的原料。柚子皮也加工成精油，因为会产生各种芳香化合物。香叶醇、芳樟醇、橙花叔醇、苯甲醇和2-苯乙醇是柚子香气的主要成分。然而，关于柚子中糖苷类成分的测定，尤其是糖苷类成分的测定，却鲜有报道。建立测定柚子中糖苷类香气前体的方法，研究糖苷类香气前体产生芳香化合物的机理，进而对柚子加工过程中的增香行为具有重要意义。

目前，植物叶、花和果实中糖苷类香气前体的检测方法主要有通过气相色谱-质谱（GC-MS）技术检测糖苷水解释放的苷元、气相色谱-质谱法通过检测三氟乙酸转化的糖苷类芳香前体衍生物。水解法可能会因为在水解过程中芳香异构体的重排以及缺乏糖基信息等因素而影响对糖苷类香气前体的定性定量分析。衍生法也存在着因糖苷类香气前体的衍生化不具有选择性而导致产品质量的差异的缺点。因此，建立一种直接测定蜜柚中糖苷类香气前体的检测方法尤为重要。

发明内容

本发明提供一种同时测定水果中香叶醇β-葡萄糖苷、香叶醇β-樱草糖苷、芳樟醇β-樱草糖苷、苯甲醇β-樱草糖苷、2-苯乙醇β-樱草糖苷和橙花叔醇β-樱草糖苷等6种糖苷类香气前体的UPLC-MS/MS检测方法。该方法首次利用超高压液相色谱-质谱联用仪，通过优化质谱条件和流动相，实现香叶醇β-葡萄糖苷、香叶醇β-樱草糖苷、芳樟醇β-樱草糖苷、苯甲醇β-樱草糖苷、2-苯乙醇β-樱草糖苷和橙花叔醇β-樱草糖苷的分离和同时测定。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的。

一种同时测定蜜柚中糖苷类香气前体的方法，包括如下步骤：

（1） 提取：称取打碎后的蜜柚样品2 g至50 mL离心管中，加入20 mL甲醇，在10000 r/min条件下均质2分钟；然后超声提取20 min，再4500 r/min下离心5 min，上清液转移至另一新的离心管中；上清液通过0.22μm有机膜过滤至进样小瓶，供高效液相色谱----串联质谱仪测定；

（2）配制基质标准工作溶液在甲醇中以1 mg/mL的浓度制备香叶醇β-葡萄糖苷、香叶醇β-樱草糖苷、芳樟醇β-樱草糖苷、苯甲醇β-樱草糖苷、2-苯乙醇β-樱草糖苷和橙花叔醇β-樱草糖苷的储备溶液；将这些储备溶液混合，然后稀释以产生连续校准标准溶液；在甲醇中制备标准混合物，配制至少五个浓度的糖苷系列基质标准工作溶液储备溶液和校准标准溶液在-18℃下保存；

（3）液相色谱-串联质谱法LC-MS/MS测定