[发明专利]番茄抗晚疫病长链非编码RNA-lncRNA40787及其克隆方法与应用方法

权利要求书

1.一种番茄抗晚疫病长链非编码RNA-lncRNA40787，其特征在于，其DNA分子序列如SEQID NO.1所示。

2.权利要求1所述番茄抗晚疫病长链非编码RNA-lncRNA40787的克隆方法，其特征在于：以野生型感晚疫病番茄早粉2号的cDNA为模板，以lncRNA40787-FP、lncRNA40787-RP为特异性引物进行PCR扩增；

所述特异性引物的序列分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示：

将得到的PCR产物与pMD-18T克隆载体连接，得到的克隆载体连接产物转化大肠杆菌DH5α并涂布在含有氨苄青霉素的LB固体培养基上，挑取单菌落进行测序，所得产物即为番茄抗晚疫病长链非编码RNA-lncRNA40787。

3.权利要求1所述番茄抗晚疫病长链非编码RNA-lncRNA40787的应用方法，其特征在于，用于沉默番茄miR394，抵御病原菌侵染。

4.根据权利要求3所述番茄抗晚疫病长链非编码RNA-lncRNA40787的应用方法，其特征在于，用于提高番茄对晚疫病的抗性。

5.根据权利要求3所述番茄抗晚疫病长链非编码RNA-lncRNA40787的应用方法，其特征在于，通过以下技术方案实现：

将含有番茄抗晚疫病长链非编码RNA-lncRNA40787的重组表达载体转化农杆菌GV3101并涂布在含有卡那霉素、链霉素及利福平的YEB固体培养基上，挑取单菌落进行菌液PCR验证；

选取阳性工程菌瞬时侵染番茄叶片，并检测叶片中miR394的表达量及叶片对晚疫病的抗性。

6.根据权利要求5所述番茄抗晚疫病长链非编码RNA-lncRNA40787的应用方法，其特征在于，还包括检测叶片对晚疫病的抗性。

7.根据权利要求5或6所述番茄抗晚疫病长链非编码RNA-lncRNA40787的应用方法，其特征在于所述重组表达载体由番茄抗晚疫病长链非编码RNA-lncRNA40787插入表达载体得到。

8.根据权利要求7所述番茄抗晚疫病长链非编码RNA-lncRNA40787的应用方法，其特征在于，所述重组表达载体的具体制备过程为：

①克隆番茄抗晚疫病长链非编码RNA-lncRNA40787：以野生型感晚疫病番茄早粉2号的cDNA为模板、以lncRNA40787-FP和lncRNA40787-RP为特异性引物进行PCR扩增；所述特异性引物的序列分别如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示：将得到的PCR产物与pMD-18T克隆载体连接，得到的克隆载体连接产物转化大肠杆菌DH5α并涂布在含有氨苄青霉素的LB固体培养基上，挑取单菌落于LB液体培养基后，提取含有番茄抗晚疫病长链非编码RNA-lncRNA40787菌体中的质粒进行测序；

②构建含有番茄抗晚疫病长链非编码RNA-lncRNA40787的重组表达载体：用限制性内切酶BamHI及SacI对上述测序正确的质粒进行双酶切，回收得到目的片段，将所述目的片段与同样经BamHI及SacI双酶切的pBI121表达载体连接，得到的表达载体连接产物即为重组表达载体。