[发明专利]免疫调节特异性嵌合抗原受体细胞及制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种免疫调节特异性嵌合抗原受体细胞及制备方法和应用。本发明通过免疫检查点调节（PD1或TIGIT）联合特异性靶向人NKG2DL的嵌合抗原受体的重组载体，并用其修饰免疫应答细胞的方法；获得的新型功能化免疫应答细胞能有效地靶向攻击多种肿瘤，及制备的用于治疗恶性肿瘤的制剂。本发明的免疫检查点调节（PD1或TIGIT）联合特异性靶向人NKG2DL的嵌合抗原受体修饰的工程免疫细胞，遏制抑制因子诱导免疫细胞的失活，并阻止肿瘤细胞的免疫逃逸，能够明显提高抗肿瘤活性。

技术领域

本发明属于免疫治疗生物医药技术领域，涉及一种免疫检查点调节联合特异性靶向人NKG2DL的嵌合抗原受体的氨基酸编码序列、及其修饰的免疫应答细胞，以及它们的制备方法和在药物制备中的应用。

背景技术

随着生物技术的飞速发展，免疫细胞治疗已成为癌症治疗领域的第四大疗法。

癌症免疫疗法主要包括过继性细胞治疗、免疫调节剂、肿瘤疫苗以及免疫结合点阻断治疗等。其中，在细胞治疗领域，CAR-T疗法无疑已成为研究机构和制药公司争相“追捧”的明星。

CAR-T(Chimeric Antigen Receptor T-Cell，嵌合抗原受体修饰的T细胞)为代表的免疫疗法，其原理主要是通过基因工程手段对病人自身提取的T细胞进行嵌合抗原受体的修饰形成CAR-T细胞，该T细胞能特异性地识别肿瘤表面相关抗原(肿瘤细胞标志物)，从而靶向杀伤肿瘤。

近年研究表明，NKG2DL蛋白的表达是细胞处于“应激状态”的一个指标，其在健康组织中很少有表达或仅短暂地表达，而通常在不同来源的各种肿瘤细胞表面有较高水平的表达。NKG2DL蛋白的受体为NKG2D，研究显示，NKG2D-NKG2DL系统在机体的抗肿瘤免疫中发挥着重要作用，NKG2D通过识别肿瘤细胞表面产生的NKG2DL来传递活化信号并激活免疫系统，从而对肿瘤细胞发挥杀伤作用。除此之外，研究发现自身免疫性疾病患者的血清中含有可溶性NKG2DL，NKG2D-NKG2DL系统在治疗自身免疫性疾病、抗炎、抗衰老等方面起到一定作用(参见Legroux L等人，Frontiers in Immunology，(2019))。因此，NKG2DL的表达作为机体发生肿瘤时肿瘤细胞上的一个特异性的改变，为肿瘤的免疫治疗提供了一个更为精确的靶点，为相关新疗法和药物的开发提供了启示。

此外，近年研究发现，第二第三代CAR能够在很大程度上提高T细胞激活增殖及杀伤能力，但是由于肿瘤细胞会过表达免疫抑制相关分子，如CD155/CD112、PD-L1/PD-L2等，当与免疫细胞上的免疫抑制分子，如TIGIT、PD1等结合后会迅速诱导该免疫细胞的失活甚至凋亡从而使肿瘤细胞产生免疫逃逸免于受到攻击。已有报道在结肠癌，胃癌肿瘤模型中，针对PD1/PD-L1，TIGIT/CD155双特异性抗体的确显示出协同作用，有良好的的抑瘤效果。因此，针对PD1/TIGIT免疫检查点的CAR-T具有良好的药用开发价值。

综上所述，研发一种免疫检查点调节联合特异性嵌合抗原受体修饰的工程化免疫应答细胞极具应用前景。该工程细胞通过识别肿瘤细胞表面产生的NKG2DL来传递活化信号并激活免疫系统，从而对肿瘤细胞发挥杀伤作用；同时识别肿瘤细胞上的免疫抑制因子，遏制免疫抑制并阻止肿瘤细胞的免疫逃逸，从而能够明显提高肿瘤细胞的杀伤效率。与此同时，该工程化细胞还具有一定的治疗自身免疫性疾病、抗炎、抗衰老等的作用，最终达到良好地临床治疗效果。

发明内容