[发明专利]超级细菌耐药基因NDM-1的RPA检测引物组、试剂盒和方法

权利要求书

1.一种超级细菌耐药基因NDM-1的RPA检测引物组，其特征在于，包括1对引物和1个探针，引物和探针如下：

NDM-1-F1：5’-CCGCCAGCTCGCACCGAATGTCTGGCAGCACACTT-3’，SEQ ID NO 1；

NDM-1-R2：5’-GCGACCGGCAGGTTGATCTCCTGCTTGATCCAGT-3’，SEQ ID NO 2；

探针NDM-1-probe：5’-TCGTCAGGGATGGCGGCCGCGTGCTGGTGGTCATACCGCCTGGACCGAT-3’，SEQ ID NO 3；

其中，离5’端碱基数31bp的胸腺嘧啶T由FAM荧光基团标记；离5’端碱基数32bp的C和33bp的A之间插入四氢呋喃分子；离3’端碱基数16bp的T由荧光淬灭基团BHQ标记。

2.一种基于权利要求1所述引物组的检测试剂盒，其特征在于，包括：冻干粉、去离子水、聚乙二醇、10μmol/L的NDM-1-F1、10μmol/L的NDM-1-R2，10μmol/L的探针和280mmol/L的醋酸镁溶液。

3.如权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，反应体系为50μL，将1剂量冻干粉和去离子水28.4μL，聚乙二醇12.5μL、10μmol/L的NDM-1-F1 2μL、10μmol/L的NDM-1-R2 2μL，10μmol/L的探针0.6μL，模板DNA 2μL和280mmol/L的醋酸镁溶液2.5μL混合。

4.一种非诊断目的超级细菌耐药基因NDM-1的RPA检测方法，其特征在于，包括下列步骤：

(1)提取待测样品的DNA为模板；

(2)利用权利要求1所述引物组或权利要求2或3所述试剂盒进行快速扩增及实时荧光检测。

5.如权利要求4所述的一种非诊断目的超级细菌耐药基因NDM-1的RPA检测方法，其特征在于，扩增程序为：39℃恒温反应20min。

6.权利要求1所述引物组在制备检测超级细菌耐药基因NDM-1的试剂盒中的应用。