[发明专利]一种快速制备重组人生长激素的纯化方法

权利要求书

1.一种快速制备重组人生长激素的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：收集菌体，缓冲液裂解提取，离心收集上清，加入缓冲液并调整pH值，层析分离，超滤浓缩。

2.根据权利要求1所述的一种快速制备重组人生长激素的纯化方法，其特征在于，在所述缓冲液裂解提取步骤中，用浓度为1～200mM的磷酸盐缓冲液并调节pH至5～9，室温搅拌提取0.5～3h。

3.根据权利要求2所述的一种快速制备重组人生长激素的纯化方法，其特征在于，所述缓冲液裂解提取步骤，包括：

1)配制浓度为1～200mM的磷酸盐缓冲液并调节pH至5～9；

2)取所述菌体以及步骤1)所得缓冲液，将二者按1～3:30的重量比在搅拌罐中混合，以100～300rpm的转速、4～30℃的温度搅拌0.5～3h。

4.根据权利要求1所述的一种快速制备重组人生长激素的纯化方法，其特征在于，在所述离心收集上清步骤中，离心的转速为8000～14000rpm，离心的时长为10～30min。

5.根据权利要求4所述的一种快速制备重组人生长激素的纯化方法，其特征在于，所述离心收集上清步骤，包括：用落地离心机以8000～15000rpm的转速离心10～30min，收集上清液、弃去固体。

6.根据权利要求1所述的一种快速制备重组人生长激素的纯化方法，其特征在于，在所述加入缓冲液并调整pH值步骤中，用浓度为0.1～0.5M的氢氧化钠溶液调节pH至5～9，而后以0.04～20μm孔径过滤去除不溶性颗粒。

7.根据权利要求6所述的一种快速制备重组人生长激素的纯化方法，其特征在于，所述加入缓冲液并调整pH值步骤，包括：

1)向所述上清中加入0.1～0.5M磷酸盐缓冲液，调整pH至5～9；

2)用0.04～20μm的过滤器进行过滤，收集滤过液。

8.根据权利要求1所述的一种快速制备重组人生长激素的纯化方法，其特征在于，所述层析分离步骤包括：

1)溶液A配制：配制20mM磷酸盐缓冲溶液，并加入0.1-0.15M氯化钠，调节pH至5-9；

溶液B配制：配制0.1-0.2M的甘氨酸溶液，调节pH至2.2-5.5；

溶液C配制：配制0.1-0.2M的甘氨酸溶液，调节pH至2.0；

溶液D配制：配制20％乙醇溶液；

2)色谱柱体积CV为40mL-500L；用溶液A平衡色谱柱3-10CV；将所述加入缓冲液并调整pH值步骤所得的产物加入到色谱柱中，上样流速为10-250cm/h；再用溶液A进行清洗3-10CV；用溶液B进行洗脱3-10CV，收集洗脱液；再用溶液C清洗3-10CV；再用溶液D清洗3-10CV，最后保存在溶液D中。

9.根据权利要求8所述的一种快速制备重组人生长激素的纯化方法，其特征在于，在所述层析分离步骤中，所使用的填料是由Thermo scientific公司出品的CaptureSelectHuman Growth Hormone Affinity Matrix系列填料。

10.根据权利要求1所述的一种快速制备重组人生长激素的纯化方法，其特征在于，在所述超滤浓缩步骤中，超滤膜包的截留分子量为3000～10000道尔顿；超滤浓缩3～20倍。