[发明专利]一种快速制备重组人生长激素的纯化方法

说明书

本发明提供了一种快速制备重组人生长激素的纯化方法，属于生物分离工程技术领域。该技术方案首先对发酵所得的菌体进行裂解，使胞内产物得以释放，而后离心收集上清，对所得到的上清液，加入缓冲液并调整pH值，再微滤去除不溶性颗粒，而后以特定条件先后进行层析分离和超滤浓缩，最终得到成品。通过对工艺方法的创新改进，本发明可以快速有效的提取纯化生长激素，得到的生长激素纯度高，同时具有工艺简单、回收率高、生产时间短等优势。

技术领域

本发明涉及生物分离工程技术领域，具体涉及一种快速制备重组人生长激素的纯化方法。

背景技术

人生长激素(human growth hormone，hGH)是由脑垂体前叶嗜酸性细胞分泌的一种非糖基化的蛋白质激素，是人类出生后促进生长的最重要的激素，具有调节人体生长代谢等多重功能。重组人生长激素(recombinant hGH，rhGH)为重组DNA技术生产的基因工程药物，由191个氨基酸残基组成，其结构和氨基酸序列与天然的hGH一致，被广泛用于成人和儿童的生长激素缺乏症。

目前，对人生长激素的纯化，国内外研究者普遍着眼于离子、疏水、分子筛等传统方法，上述纯化工艺存在着步骤繁杂、操作时间长、回收率低、生产成本高等问题。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种快速制备重组人生长激素的纯化方法，以解决现有技术中，针对重组人生长激素的常规纯化方法，其工艺复杂、工艺步骤多、生产时间长、生产成本高等技术问题。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种快速制备重组人生长激素的纯化方法，包括以下步骤：收集菌体，缓冲液裂解提取，离心收集上清，加入缓冲液并调整pH值，层析分离，超滤浓缩。

作为优选，在所述缓冲液裂解提取步骤中，用浓度为1～200mM的磷酸盐缓冲液并调节pH至5～9，室温搅拌提取0.5～3h。

作为优选，所述缓冲液裂解提取步骤，包括：

1)配制浓度为1～200mM的磷酸盐缓冲液并调节pH至5～9；

2)取所述菌体以及步骤1)所得缓冲液，将二者按1～3:30的重量比在搅拌罐中混合，以100～300rpm的转速、4～30℃的温度搅拌0.5～3h。

作为优选，在所述离心收集上清步骤中，离心的转速为8000～14000rpm，离心的时长为10～30min。

作为优选，所述离心收集上清步骤，包括：用落地离心机以8000～15000rpm的转速离心10～30min，收集上清液、弃去固体。

作为优选，在所述加入缓冲液并调整pH值步骤中，用浓度为0.1～0.5M的氢氧化钠溶液调节pH至5～9，而后以0.04～20μm孔径过滤去除不溶性颗粒。

作为优选，所述加入缓冲液并调整pH值步骤，包括：

1)向所述上清中加入0.1～0.5M磷酸盐缓冲液，调整pH至5～9；

2)用0.04～20μm的过滤器进行过滤，收集滤过液。

作为优选，所述层析分离步骤包括：

1)溶液A配制：配制20mM磷酸盐缓冲溶液，并加入0.1-0.15M氯化钠，调节pH至5-9(更优的，该pH值为6～8)；

溶液B配制：配制0.1-0.2M的甘氨酸溶液，调节pH至2.2-5.5(更优的，该pH值为2.5～4.5)；

溶液C配制：配制0.1-0.2M的甘氨酸溶液，调节pH至2.0；

溶液D配制：配制20％乙醇溶液；