[发明专利]一种去核糖体RNA测序文库的构建方法及试剂盒

权利要求书

1.一种去核糖体RNA测序文库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.将total RNA片段化，然后将rRNA与anti rRNA探针进行杂交，形成rRNA与单链DNA的杂交链；通过随机引物对未被杂交的RNA模板进行链特异性的逆转录形成1st cDNA，形成RNA与1st cDNA的杂交链；所述anti rRNA探针中间经dU修饰；

S2.分别将S1中的rRNA链和RNA模板置换成含dUTP的2nd cDNA，均形成双链cDNA；

S3.进行末端修复并在3’末端加A，两端连接高通量测序专用的接头；

S4.去除含dUTP的模板链，进行文库的PCR扩增，经磁珠纯化得到测序文库。

2.根据权利要求1所述的去核糖体RNA测序文库的构建方法，其特征在于，所述AntirRNA的两个末端进行封闭修饰。

3.根据权利要求2所述的去核糖体RNA测序文库的构建方法，其特征在于，所述AntirRNA的5’端封闭修饰为氨基修饰，Anti rRNA的3’端封闭修饰为C6 Spacer修饰、C3 Spacer修饰或氨基修饰加C6 Spacer修饰。

4.根据权利要求1所述的去核糖体RNA测序文库的构建方法，其特征在于，所述AntirRNA探针长度小于100bp。

5.根据权利要求1所述的去核糖体RNA测序文库的构建方法，其特征在于，所述TotalRNA通过Mg²⁺将RNA进行片段化，所述片段化反应包含Tris-HCl，KCl。

6.根据权利要求1所述的去核糖体RNA测序文库的构建方法，其特征在于，所述步骤S2中所述逆转录过程的反应体系包括逆转录酶、逆转录反应缓冲液、逆转录引物、放线菌素D。

7.根据权利要求1所述的去核糖体RNA测序文库的构建方法，其特征在于，所述步骤S4用UDG酶去除含dUTP的模板链。

8.一种去核糖体RNA建库试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-7任意一项所述去核糖体RNA测序文库的构建方法中的探针。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括纯化磁珠，Index和RNA建库体系。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述纯化磁珠为Agencourt AMPure XPbeads；所述Index为ABclonal RK20351；所述RNA建库体系为ABclonal RK20301、ABclonaRK20304或ABclonal RK20353加ABclona RK20222。