[发明专利]一种检测金黄色葡萄球菌的新方法及其检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于组合特征肽的靶向分析检测金黄色葡萄球菌及肠毒素的新方法及试剂盒。具体地本发明中公开了可作为金黄色葡萄球菌及其分泌的肠毒素A和肠毒素B检测标准的特征肽。本发明的特征肽检测技术实现了同时检测金黄色葡萄球菌及其肠毒素，极大的减少了检测时间和假阳性结果，为金黄色葡萄球菌及其肠毒素的检出提供了可靠有效的质量控制方法。

技术领域：

本发明属于食源性致病菌检测领域，以金黄色葡萄球菌及其肠毒素的特征肽 为研究对象，开发了一种基于特征肽的靶向分析检测食品中金黄色葡萄球菌的新 方法及其检测试剂盒。

背景技术：

食源性致病菌的存在严重威胁着人类健康与公共卫生。食物携带的致病微生 物可以在宿主体内繁殖并表达毒力因子，进而损伤机体健康。尽管公共卫生水平 不断提高，但时至今日食源性致病菌仍频繁引起疾病暴发。高效严谨的检验检疫 手段，对于食源性致病菌危害的控制和国民食品安全极其重要。

金黄色葡萄球菌是一种典型的食源性致病菌，常用的检测方法有凝固酶法、 酶联免疫法(ELISA)、荧光PCR。凝固酶试验技术基于致病性葡萄球菌产生的 凝固酶与纤维蛋白原反应产生沉淀实现检疫，但该方法存在灵敏度低、生物危险 性大、成本高、制剂有限等缺点。酶联免疫反应可以通过金黄色葡萄球菌肠毒素 与抗体的相互作用实现快速检测，但该方法常由于检测样本中所含无关抗原造成 假阳性结果且成本偏高。随着分子技术的发展，依赖于特定识别元件的聚合酶链 反应逐渐普及。PCR的特异性和检测速度卓越，然而这种基于靶标的方法局限 于特定的引物，被检产品中的扩增抑制因子也会干扰检测结果。另外，经历遗传 修饰的菌体仍然可能产生假阳性或阴性结果。因此，发展快速、准确的检测金黄 色葡萄球菌的方法具有重要意义。

分泌性毒素定义了金黄色葡萄球菌的毒力，引起食物中毒最主要的毒力因子 就是金黄色葡萄球菌肠毒素。虽然金黄色葡萄球菌是热敏性的，但其肠道毒素却 有着很好的热稳定性，这使得毒素严重污染的食物在肠道中很难被代谢。金黄色 葡萄球菌肠毒素是由不同血清学类型组成的家族，它们在结构、功能和序列上具 有相似性，最常见的为SEA和SEB。已有研究指出，通过食物摄入20-100ng 的肠毒素，就可以引起食物中毒。导致大量呕吐、腹泻、腹痛或恶心症状等症状。 然而，目前检测金黄色葡萄球菌和其肠毒素的检测往往不是同一种方法，这种时 间差往往会造成毒素的积累。目前大多金黄色葡萄球菌检测方法是针对于活菌检 测，这意味着即使金黄色葡萄球菌呈现阴性结果也有可能含有过量的肠毒素。鉴 于葡萄球菌食源性中毒的后果，必须对食品中的肠毒素一并检测。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种适用于金黄色葡萄球菌特征肽的靶向分析检测 方法及其检测试剂盒。

本发明的另一目的在于提供一种适用于金黄色葡萄球菌肠毒素特征肽的靶 向分析检测方法及其检测试剂盒。

本发明的第一方面，提供了一种基于组合特征肽的靶向分析检测金黄色葡萄 球菌及肠毒素的检测方法，所述组合特征肽包含13条金黄色葡萄球菌及肠毒素 特异性多肽。

在另一优选例中，所述金黄色葡萄球菌及肠毒素的组合特征肽选自下组：

I1(AYLAVPAAPK)

I2(DYNSPTLIGWVK)

I3(SQSYGQGSDQIR)

I4(AFAQLVTK)

I5(AGYTVNNTPK)

I6(SISSGYTSGR)

I7(DFVNALPTLPDSK)

I8(NLVSEVTDAVEK)

I9(NITQDQDIHAVPK)

SEA1(YNLYNSDVFDGK)