[发明专利]一种脱细胞基质与环戊烯酮类前列腺素组合物的制备方法

权利要求书

1.一种脱细胞基质与环戊烯酮类前列腺素组合物的制备方法，所述环戊烯酮类前列腺素为15d-PGJ₂-NC，其特征在于，通过以下步骤实现：

(1)脱细胞基质的制备：

(a)将牙周韧带细胞以高密度接种于12孔细胞培养板；

(b)培养板中加入含一定浓度抗坏血酸的完全培养基，培养获得牙周韧带细胞膜片；

(c)采用静电纺丝法获得PCL/GE电纺纳米纤维膜，经紫外消毒后包裹上牙周韧带细胞膜片；

(d)采用表面活性剂联合DNA酶处理上述细胞膜片，漂洗后获得相应的脱细胞基质；

(2)15d-PGJ₂-NC的制备，采用乳化溶剂蒸发法：

将PLGA、司班60、硬脂酸甘油酯、15d-PGJ₂，溶于丙酮中形成油相；水相为吐温80充分溶于ddH₂O，将溶解后的油相缓慢加入水相中，边加边搅拌，持续搅拌10分，旋转蒸发，制备的15d-PGJ₂-NC溶液的药物终浓度为100mg/L；

(3)脱细胞基质与15d-PGJ₂-NC组合物：

脱细胞基质与15d-PGJ₂-NC分别包装，15d-PGJ₂-NC负载明在明胶海绵上，明胶海绵负载的15d-PGJ₂-NC浓度为100mg/L，体积为25μL。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(a)中牙周韧带细胞接种密度为1×10⁵个/孔。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(b)加入的培养基中抗坏血酸的浓度为100μg/mL，细胞膜片培养周期约为10～14天，观察到细胞膜片边缘稍卷曲即代表细胞膜片已培养成熟。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(c)通过常温下称取0.6gPCL溶于10mL的四氟乙烯溶液中，0.6g GE溶于10mL的四氟乙烯溶液中振荡至完全溶解，制备6wt％的PCL/TFE溶液和GE/TFE溶液，按质量比7:3混合6wt％的PCL/TFE和6wt％的明胶/TFE来制备PCL-GE溶液，向溶液中加少量0.2v/v％的HAc/TFE溶液，得到透明的PCL-GE-HAc溶液，用注射器吸取PGH电纺液，电纺电压20kV，接收距离设置为8cm，注射泵推进速率为0.3mL/h，温度50℃，设置静电纺丝机的取向为90°进行层层堆积，使用干净的尖头镊子收集，放入干净的培养皿，-40℃冷冻4h后冷冻干燥24h，使用前紫外过夜灭菌。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(d)中处理细胞膜片的试剂为Triton X-100/NH₄OH溶液和I型DNA酶溶液，漂洗液为PBS缓冲液。