[发明专利]一种脱细胞基质与环戊烯酮类前列腺素组合物的制备方法

说明书

本发明公开了一种脱细胞基质与环戊烯酮类前列腺素组合物的制备方法，本发明由负载于聚己内酯/明胶电纺纳米纤维膜的牙周韧带细胞脱细胞基质与15d‑PGJ₂‑NC组合而成，该方法首次将两者组合，并用于牙周缺损。相对于单一组分的应用，组合物兼具组织再生和抗炎作用，适用牙周炎性环境。本发明首次采用经明胶改性的PCL/GE作为脱细胞膜片承托支架，相对于单纯的PCL或其他混纺比例的PCL/GE，具有更好的促进细胞粘附与血管化作用。本发明所需材料的制备方法与设备需求简单、成本低廉、所得材料一致性较好。动物实验结果表明，本发明组合物应用可达到良好的修复牙周缺损的效果，为该组合物的临床应用提供了初步的科学证据。

技术领域

本发明属于组织工程与再生医学领域，涉及一种脱细胞基质与环戊烯酮类前列腺素组合物的制备方法，是一种由牙周韧带细胞膜片的脱细胞基质与15d-PGJ₂-NC组合的组合物制备方法，可用于牙周缺损修复。

背景技术

慢性牙周炎是一种以牙周组织破坏为特征的慢性感染性疾病，在我国发病率高达80％，是成年人缺牙的首要原因。牙周组织由复杂的软硬组织构成，包括牙槽骨，牙周韧带和牙骨质，修复牙周组织缺损是牙周治疗的最终目标。传统的牙周组织再生疗法，如骨移植、引导组织再生术、生长因子、局部应用釉基质蛋白等，可使牙周膜、牙骨质和牙槽骨获得一定程度的再生，但其再生是极有限的且难以预计的。而且，牙周炎导致的牙周组织缺损处于炎性环境中，因此如何在牙周炎性微环境中修复牙周缺损仍是一大难题。

研究表明，牙周韧带细胞与其他牙周来源的细胞如牙龈结缔组织和牙槽骨细胞相比更适合作为牙周再生的种子细胞。采用体外培养患者自身的带有完整细胞外基质的牙周韧带干细胞膜片后再植的细胞膜片技术，使牙周韧带细胞直接接触到牙根表面促进组织原位再生，有助于早期新附着形成和牙槽骨新生，该方法在小动物和大动物实验中都被证实可成功获得牙周再生，表明牙周韧带细胞及其细胞外基质具有促进牙周再生的作用。但该方法应用于临床仍有许多局限，如依赖患者自身的细胞、需要经过体外培养后再植入和经认证具有干细胞培养资质的实验室设施等。而采用脱细胞基质可克服上述缺点。脱细胞基质去除了细胞和可溶性蛋白等引起免疫反应的物质，保留了天然结构，现有研究证实体外培养的组织工程化的脱细胞结构可保持其结构完整性，维持分子功能，体内移植后可提高组织再生能力。此外，在脱细胞基质中还发现有成纤维细胞生长因子-2、转化生长因子-2、血管内皮生长因子等对细胞生长分化有重要作用的生长因子。有学者发现脱细胞牙周韧带基质可被同种异体的人牙周韧带干细胞再细胞化。基于上述研究，脱细胞牙周韧带基质极有希望成为兼具良好牙周再生潜力和易于临床转化优点的可商品化的牙周组织工程产品。

然而，牙周韧带细胞脱细胞基质的机械性能较差，影响其处理与转运。使用聚己内酯制成的纳米电纺纤维膜已被证明具有支持用于牙周韧带和牙本质等软硬组织界面再生纤维的细胞膜片所需的生物力学特性。但是单纯的PCL电纺纤维膜亲水性较差，实际操作中成功率不高。天然材料明胶具有良好的亲水性，可以与其他材料混纺改善其生物力学特性。研究表明，PCL/GE电纺纳米纤维膜具有良好的细胞粘附特性和促进组织再生能力。其中PCL与GE混纺比例为70:30时，具有更好的细胞粘附、促进血管化效果。因此，PCL/GE电纺纤维膜用于负载牙周韧带细胞脱细胞基质增强其机械强度可能具有更好的再生应用前景。