[发明专利]一种检测八宝丹指纹图谱的方法及八宝丹标准指纹图谱和用途

说明书

本发明涉及一种检测八宝丹指纹图谱的方法及八宝丹标准指纹图谱和用途，具体涉及一种检测八宝丹指纹图谱的方法、包含该方法的建立八宝丹标准指纹图谱的方法、八宝丹标准指纹图谱和应用。根据本发明的检测八宝丹指纹图谱的方法，所得到的色谱图中，峰数量较多，灵敏高，基线平稳、噪音小，响应敏锐，响应值大，分离度好。此外，空白溶剂对供试品溶液的测试不存在干扰，专属性良好。方法的精密度、稳定性和重复性良好。根据本发明的建立八宝丹标准指纹图谱的方法和所得到的八宝丹标准指纹图谱可以用于进行八宝丹的质量控制。

技术领域

本发明属于中药分析领域，涉及一种检测八宝丹指纹图谱的方法、包含该方法的建立八宝丹标准指纹图谱的方法、八宝丹标准指纹图谱和应用。

背景技术

中药指纹图谱技术因可全面标示中药主要化学成分的特性及其比例的特点，越来越多用于中药的质量控制。色谱法是分析化学领域中发展较快，应用较广泛的分析方法之一，也是中指纹图谱最基本的技术。常用的色谱法有薄层色谱法、液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法，其中高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)具有应用范围广、分析速度快、灵敏度高等优点，是目前研究中药指纹图谱应用最广泛的方法。蒸发光散射检测器(Evaporative Light Scattering Detector，ELSD)是一种通用型质量检测器，可弥补在HPLC中应用最广的紫外检测器对检测物质必须具有吸收紫外光的生色团的要求。ELSD作为一种浓度型检测器，在无紫外或紫外末端吸收的未知化合物的纯度检测过程中，显示出极大的优越性。

八宝丹源自中药古方，具有清利湿热、活血解毒、去黄止痛等功效。适用于湿热蕴结所致发热、黄疸、小便黄赤、恶心呕吐、纳呆、肋痛腹胀、舌苔黄腻或厚腻干白，或湿热下注所致尿道灼热刺痛、小腹胀痛，以及传染性病毒性感染、急性胆囊炎、急性泌尿系统感染等。

现代药理学研究表明八宝丹具有抗炎、解热、镇痛、保肝、利胆、去黄等功效。临床实验显示，八宝丹胶囊治疗慢性胆囊炎总有效率高于胆舒胶囊。八宝丹胶囊辅助黄疸型病毒性肝炎治疗，可改善临床症状及肝功能，具有较好的退黄效果，疗效和苦黄胶囊相似；可有效地改善病毒性肝炎所致的难治性黄疸；对慢性病毒感染引起的肝细胞损伤具有一定的保护作用。

此外，八宝丹还可用于肿瘤的辅助治疗。八宝丹对体外培养的人肺腺癌A549细胞、人宫颈癌Hela细胞、人结肠癌LoVo细胞均有明显的杀伤作用。八宝丹抑制骨肉瘤U-20S细胞增殖并诱导其凋亡，药效呈时间和剂量的依赖关系。八宝丹与抗肿瘤药物联合用药，在临床上能够降低化疗药物的副作用，提高患者生活质量。此外，八宝丹可促进正常及荷瘤小鼠的T淋巴细胞免疫功能，可降低荷瘤小鼠外周血、脾脏和骨髓细胞中髓系来源的抑制性细胞(MDSCs)比例，改善肿瘤免疫。

近年，随着监管部门对药品质控提出更高要求，要求生产厂家严格控制产品批间稳定性，因此采用有效的质量控制方法尤为重要。

由于八宝丹原料成分多，涉及化学成分更多，对其进行标准指纹图谱的研究非常困难。因此，目前还没有关于检测八宝丹指纹图谱的方法，建立八宝丹标准指纹图谱的方法以及采用其进行质量控制的研究。

发明内容

为了更全面有效控制八宝丹的质量，本发明人经仔细研究采用HPLC-ELSD法并对流动相系统、流动相梯度洗脱条件、色谱柱、提取溶剂等条件进行研究，得到了一种检测八宝丹指纹图谱的方法，并由此得到了建立八宝丹标准指纹图谱的方法和八宝丹标准指纹图谱，其可以用于进行八宝丹的质量控制，由此完成了本发明。

本发明一方面提供了一种检测八宝丹指纹图谱的方法，所述方法用配备有蒸发光散射检测器(ELSD)的高效液相色谱仪进行检测，色谱条件如下：

色谱柱：BDS Hypersil^TM C₁₈(5μm，250×4.6mm)；

流动相：0.1％甲酸水溶液(A)-乙腈(B)，