[发明专利]SARS-CoV-2 RBD中和核酸适体的筛选方法及核酸适体

权利要求书

1.一种SARS-CoV-2RBD中和核酸适体的筛选方法，包括如下步骤：

1)化学合成一个60-120个碱基的DNA初始文库；取初始文库溶于结合缓冲液中，进行变性处理；

2)将至少两种源表达的重组SARS-CoV-2RBD蛋白作为适体筛选的交叉靶标；

3)将预处理的DNA文库与第一种源表达的重组SARS-CoV-2RBD蛋白共孵育；产物进行PCR扩增；PCR产物用于筛选；

4)先通过SELEX方法以保证第一种源表达的SARS-CoV-2RBD蛋白与DNA链的多个拷贝结合；

5)从步骤4)筛选之后，使用至少第二种源表达的SARS-CoV-2RBD蛋白与DNA孵育，以获得与至少两种源表达的RBD都能结合的序列；

6)引入ACE2竞争；之后收集与ACE2竞争的序列。

2.根据权利要求1所述的一种SARS-CoV-2RBD中和核酸适体的筛选方法，其特征在于：

交叉靶标包括人源表达的重组SARS-CoV-2RBD蛋白以及通过昆虫表达的重组SARS-CoV-2RBD蛋白。

3.根据权利要求1所述的一种SARS-CoV-2RBD中和核酸适体的筛选方法，其特征在于：

步骤4)，在SELEX方法筛选过程中，采用反筛靶标，反筛压力逐轮增加。

4.根据权利要求1所述的一种SARS-CoV-2RBD中和核酸适体的筛选方法，其特征在于：

步骤5)中，利用His-tag RBD修饰的Ni琼脂糖微球来监测富集的过程。

5.根据权利要求1至4任一项所述的一种SARS-CoV-2RBD中和核酸适体的筛选方法筛选得到的序列。

6.SARS-CoV-2RBD中和核酸适体，其特征在于：其包括如下序列中的至少一种：

SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:15。

7.根据权利要求6所述的SARS-CoV-2RBD中和核酸适体在制备新冠病毒SARS-CoV-2感染的检测试剂、预防形病毒感染药物或治疗药物中的用途。

8.根据权利要求6所述的SARS-CoV-2RBD中和核酸适体在用于中和环境中的新冠病毒SARS-CoV-2中的用途。

9.根据权利要求6所述的SARS-CoV-2RBD中和核酸适体，其特征在于：其包括如下序列中的至少一种：

1)17-13：ATCCAGAGTGACGCAGCACCCAAGAACAAGGACTGCTTAGGATTGCGATAGGTTCGGGGGACACGGTGGCTTAGTA；

2)17-13C3：CGCAGCACCCAAGAACAAGGACTGCTTAGGATTGCGATAGGTTCGG。

10.根据权利要求9所述的SARS-CoV-2RBD中和核酸适体在制备预防和/或治疗新冠病毒SARS-CoV-2感染药物中的用途。

11.SARS-CoV-2RBD中和核酸适体，其特征在于：为SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:15所示序列的突变体或截短序列。

12.如权利要求11所述的SARS-CoV-2RBD中和核酸适体，其特征在于：所述的突变体，为和SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:15所示序列具有80％以上同源性的序列。

13.如权利要求11所述的SARS-CoV-2RBD中和核酸适体，其特征在于：所述的突变体，为和SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:15所示序列具有90％以上同源性的序列。

14.根据权利要求11至13任一项所述的SARS-CoV-2RBD中和核酸适体在制备新冠病毒SARS-CoV-2感染的检测试剂、预防形病毒感染药物或治疗药物、或中和环境中的新冠病毒中的用途。