[发明专利]一种基于量子点标记的检测试纸条及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种基于量子点标记的沙门氏菌检测试纸条及其制备方法，属于食品安全检测领域。通过将ZnS:Mn量子点连接沙门氏菌适配体作为信号探针，利用试纸条层析原理，实现对沙门氏菌的检测。试纸条由样品垫、硝酸纤维素膜(NC膜)、吸水纸及背板几部分组成。利用BioDot三维喷点仪将连接有链霉亲和素的适配体互补序列与Poly A喷涂固定在NC膜上，形成检测线T线及质控线C线。量子点与沙门氏菌适配体(适配体含有Poly T序列)偶联作为信号探针，信号探针与样品溶液混合后滴加在样品垫上时，由于吸水纸造成的毛细管力作用，由样品垫流经NC膜向吸水纸迁移。根据T线与C线的荧光强度比例实现对沙门氏菌的检测。

技术领域

本发明属于食品安全检测领域，尤其是涉及一种基于量子点标记的沙门氏菌检测试纸条及其制备方法与应用。

背景技术

食源性疾病已成为全球性的公共卫生问题，其中由食源性致病菌引起的食源性疾病发病率最高，对人类健康造成了巨大威胁。根据《国家卫计委关于2015年全国食物中毒事件情况的通报》，微生物性食物中毒人数最多，占全年食物中毒总人数的53.7％。我国每年约有3亿人因沙门氏菌而患病，占病原菌食源性疾病总致病的70-80％。由食源性致病菌引起的食物中毒事件，无论是发达国家还是发展中国家，其报道均屡见不鲜。其中，沙门氏菌已经成为世界范围内引起人类感染、食品污染和细菌性食物中毒的重要食源性致病菌。然而，传统的食源性致病菌检测方法在检测时间、灵敏度和特异性上存在一定的缺陷，不能满足日益严格的检测需要。因此，发展更为快捷，方便、灵敏度高和特异性好的检测方法对保障食品安全具有重要意义。

核酸适配体(Aptamer)是从体外筛选得到的一类能与相应配体专一性紧密结合的单链寡核苷酸序列。这种寡核苷酸序列形成的高级结构能够识别与之对应的任何类型的蛋白和低分子等靶物质，并与靶物质具有高度亲和力。与抗体相比，适配体的靶分子范围广，体外筛选，易人工合成和修饰，分子较小，稳定性好，对温度不敏感，容易保存，而且适配体作为识别分子已经在临床诊断、临床治疗、药物运输、蛋白质组研究和食品安全中得到广泛应用。

近年来，新型纳米材料在分析检测中的快速发展受到越来越多的科研工作者的青睐，并涌现出了很多具有优秀特性的纳米材料。磁性纳米材料依靠其优异的性能以及独特的结构，被广泛的应用于食品安全检测以及生物医学检测等领域。磁性纳米材料在食源性致病菌的分离富集中，也有广泛的应用。食品中污染的食源性致病菌，数量通常比较少，常规的分析方法通常无法进行快速，高效的检测。经过功能化和生物学修饰的磁性纳米材料，可以很好的识别通常难以检测出来的致病菌，并且可以在外加磁场的作用下，对食品中少量的食源性致病菌进行富集分离。量子点(quantum dots，QD)是由有限个数目的原子组成的一种三维团簇，其3个维度的尺寸均属于纳米级别。其尺寸一般在1～10nm之间，小粒径使得电子和空穴被量子限域，连续能带变成具有分子特性的分立能级结构，在激发光的照射下发射出荧光，并且可以通过调控量子点的大小改变其光吸收和发射特性。宽波长激发窄波长发射、较高的荧光量子产率、良好的生物相容性使得量子点引起了生命科学领域研究者的广泛兴趣，使其在生物医学成像、药物筛选、光动力学疗法、生物传感器等众多领域应用广泛。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明申请人提供了一种基于量子点标记的沙门氏菌检测试纸条及其制备方法与应用。本发明方法操作简便，流程简单，可以用于口岸单位针对沙门氏菌检测的现场快速筛查。

本发明的技术方案如下：

一种基于量子点标记的试纸条，包括样品垫、硝酸纤维素膜NC膜、吸水纸及背板，NC膜粘贴在背板上，样品垫与吸水纸分别粘贴于NC膜两端，并与NC膜边缘重合2-4mm，所述NC膜上有检测线T线及质控线C线，所述T线与C线间隔5mm，所述T线喷涂有链霉亲和素与生物素修饰适配体互补链的结合物，所述C线喷涂有链霉亲和素与生物素修饰Poly A的结合物。

所述的试纸条的制备方法，具体制备方法如下所示：