[发明专利]一种猪细小病毒与乙型脑炎二联亚单位疫苗及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种免疫原性组合物，其特征在于，包括：猪细小病毒VP2蛋白和乙型脑炎E蛋白；

所述猪细小病毒VP2蛋白和乙型脑炎E蛋白为利用SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示序列在昆虫-杆状病毒真核表达系统表达得到。

2.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述猪细小病毒VP2蛋白和所述乙型脑炎E蛋白的摩尔比为0.5～1.5:1～2。

3.根据权利要求2所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述猪细小病毒VP2蛋白的含量为20～40μg/mL，所述乙型脑炎E蛋白的含量为40～60μg/mL。

4.根据权利要求1-3任一项所述免疫原性组合物，其特征在于，所述真核表达系统中使用pFastdual载体构建重组穿梭载体，和/或，所述真核表达系统中使用昆虫细胞HighFive^TM进行目的蛋白的表达。

5.一种猪细小病毒与乙型脑炎二联亚单位疫苗，其特征在于，包括权利要求1-4任一项所述免疫原性组合物和佐剂。

6.根据权利要求5所述的猪细小病毒与乙型脑炎二联亚单位疫苗，其特征在于，所述佐剂为ISA 15VG佐剂，所述猪细小病毒VP2蛋白和乙型脑炎E蛋白的质量总和与所述佐剂的质量比为3～5:1。

7.权利要求5或6所述猪细小病毒与乙型脑炎二联亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，包括：

将SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示序列的DNA分子构建至重组载体上，通过昆虫-杆状病毒真核表达系统表达得到猪细小病毒VP2蛋白和乙型脑炎E蛋白，配以佐剂制备成二联亚单位疫苗。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，包括：

(1)将SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示序列的DNA分子构建至pFastdual载体上得到重组质粒pFastdual-PPV VP2和pFastdual-JEV E；

(2)将重组质粒pFastdual-PPV VP2和pFastdual-JEV E分别转染至大肠杆菌感受态细胞DH10Bac中制备得到重组杆粒rBac-PPV VP2和rBac-JEV E；

(3)利用脂质体转染发将重组杆粒rBac-PPV VP2和rBac-JEV E分别转染至sf9昆虫细胞中于25～29℃培养48-72h后收集细胞培养上清液得到重组杆状病毒，再将重组杆状病毒接种于昆虫细胞High Five^TM中进行目的蛋白PPV VP2和JEV E的表达；

(4)将步骤(3)表达得到的目的蛋白PPV VP2和JEV E配以佐剂制备成二联亚单位疫苗。

9.权利要求1-4任一项所述免疫原性组合物在制备用于猪细小病毒，和/或，乙型脑炎的免疫的药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述免疫原性组合物在所述药物中的含量为70～90μg/mL。