[发明专利]一种基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法

权利要求书

1.一种基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)构建表达氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的纤维二糖水解酶的重组工程菌，诱导表达获得纤维二糖水解酶；所述重组工程菌的宿主细胞为大肠杆菌细胞，所述纤维二糖水解酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

(2)以纤维二糖水解酶为催化剂，以淫羊藿苷为底物进行转化反应，利用缓冲液调节反应体系pH值＝6～7，转化反应的温度为40～50℃，反应结束后将反应液分离纯化，制得淫羊藿次苷Ⅱ。

2.如权利要求1所述的基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法，其特征在于，将活化后的重组工程菌接种于含有抗生素的LB培养基中，培养至OD₆₀₀值为0.6～1，加入1～3g/L的乳糖或0.1～0.4mmol/L的IPTG，诱导结束后离心收集菌体，制备粗酶液，利用粗酶液进行转化反应。

3.如权利要求1所述的基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法，其特征在于，反应体系中，以0.2M磷酸钠缓冲液或0.2M柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液作为反应介质，以控制反应体系pH值＝6～7。

4.如权利要求1所述的基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法，其特征在于，酶的添加量以湿菌体计为3～10mg/mL，底物初始浓度为30～100μg/mL。

5.如权利要求1所述的基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法，其特征在于，采用甲醇或二甲基亚砜溶解淫羊藿苷后，再加入到反应体系中，反应体系中甲醇或二甲基亚砜的体积百分比浓度为1％～10％。

6.如权利要求1所述的基于酶催化制备淫羊藿次苷Ⅱ的方法，其特征在于，所述分离纯化包括：反应液用等体积的乙酸乙酯萃取，收集有机相，有机相依次经饱和氯化钠溶液洗涤、无水硫酸钠干燥，最后旋蒸去除乙酸乙酯，得到淫羊藿次苷Ⅱ。