[发明专利]一株重组米曲霉菌株及其曲酸发酵方法与应用

权利要求书

1.一株重组米曲霉（Aspergillus oryzae）菌株，来自米曲霉自源基因重组米曲霉菌株，保藏号CGMCC18557，保藏机构:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC。

2.权利要求1所述重组米曲霉菌株的构建方法，其特征在于：将保藏号为CGMCC3.042的米曲霉菌株自体的次级代谢产物全局调控因子laeA 基因、曲酸合成基因簇内kojA, kojR,kojT基因、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶gdh基因分别整合到米曲霉基因组上pyrG基因、ku70基因、msn2基因得到的重组米曲霉菌株CGMCC18557；所述次级代谢产物全局调控因子laeA 基因受PsodM启动子调控，所述曲酸合成基因簇内kojA, kojR, kojT基因受PglaA启动子调控，所述葡萄糖-6-磷酸脱氢酶gdh基因受PgpdA启动子调控；

所述次级代谢产物全局调控因子laeA 基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述PsodM启动子为诱导型启动子，该启动子的核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示；

所述曲酸合成基因簇内kojA, kojR, kojT基因核苷酸序列如SEQ ID NO.6，其氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示；

所述葡萄糖-6-磷酸脱氢酶gdh基因核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，其氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示；所述PgpdA启动子为组成型启动子，该启动子的核苷酸序列如SEQ IDNO.16所示。

3.权利要求1所述的重组米曲霉菌株在提高曲酸产量方面的应用。

4.一种次级代谢产物全局调控因子laeA 基因表达框，其特征在于所述表达框包含pyrGL左臂、PsodM启动子、次级代谢产物全局调控因子laeA基因、pyrGR右臂、按照pyrGL-PsodM-laeA-pyrGR的顺序排布；所述pyrGL左臂的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述pyrGR右臂的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

5.一种曲酸合成基因簇内kojA, kojR, kojT基因表达框，其特征在于所述表达框包含ku70左臂、PglaA启动子、曲酸合成基因簇内kojA, kojR, kojT基因、pyrG基因、曲酸合成基因簇kojT基因3’部分终止子、ku70R、按照ku70L-PglaA-kojA,KojR,kojT-pyrG-kojT3’-ku70R的顺序排布；所述ku70L左臂的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；所述PglaA启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；所述曲酸合成基因簇内kojA, kojR, kojT基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述pyrG的核苷酸序列如SEQ ID NO.10；所述kojT终止子的核苷酸序列如SEQ ID NO.11；所述ku70R右臂的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。

6.一种葡萄糖-6-磷酸脱氢酶gdh基因表达框，其特征在于所述表达框包含msn2L左臂、PgpdA启动子、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶gdh基因、pyrG、msn2R右臂按照msn2L-PgpdA-gdh-pyrG-msn2R的顺序排布；所述msn2L左臂的核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示；所述PgpdA启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示；所述葡萄糖-6-磷酸脱氢酶gdh基因的序列如SEQID NO.13所示；所述pyrG的核苷酸序列如SEQ ID NO.10；所述msn2R右臂的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示。