[发明专利]一株重组米曲霉菌株及其曲酸发酵方法与应用

说明书

本发明以基因工程方法构建一株高产曲酸,自源基因重组米曲霉菌株CGMCC No.18557(Aspergillus oryzae)，该米曲霉的次级代谢产物全局调控因子laeA基因、曲酸合成基因簇内kojA,kojR,kojT基因、葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶gdh基因分别整合到自体基因组上pyrG基因、ku70基因、msn2基因得到各基因过表达的重组米曲霉菌株CGMCC No.18557；所述次级代谢产物全局调控因子laeA基因受PsodM启动子调控，所述曲酸合成基因簇内kojA,kojR,kojT基因受PglaA启动子调控，所述葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶gdh基因受PgpdA启动子调控。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其是涉及一株重组米曲霉菌株及其曲酸发酵方法。

背景技术

曲酸是一种重要的有机酸。曲酸在食品工业、化妆品、卫生、纺织业、禽畜生产、化工、医药、环保等领域都有十分广阔的应用。目前曲酸的工业应用正在被更多地开发和研究，市场需求以每年5-7%递增，未来也将会具有更加广阔的市场前景。

米曲霉作为重要的曲酸发酵菌株拥有良好的发酵特性。以葡萄糖为发酵原料时，米曲霉可利用葡萄糖直接发酵生成曲酸，而不必破坏葡萄糖的碳骨架。米曲霉是一种曲酸发酵的重要菌株，对米曲霉菌株CGMCC3.042进行基因工程改造是提高曲酸发酵水平的重要手段，而米曲霉对多种真菌常用抗性不敏感，因而常用营养缺陷作为标记。

曲酸是由米曲霉分泌的一种次级代谢产物，受多种转录调控因子调控，其中laeA基因，曲酸合成基因簇内kojA,kojR,kojT基因，在米曲霉中可以显著正调控其次级代谢产物的生成，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶是戊糖磷酸途径的关键酶，对糖次级代谢必不可少，而msn2基因敲除菌株曲酸产量也会有所提高。

发明内容

针对现有菌株存在的产量较低的问题，本发明提供了一株高水平发酵生产曲酸米曲霉菌株。本发明方法实现了次级代谢产物全局调控因子laeA 基因、曲酸合成基因簇内kojA, kojR, kojT基因、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶gdh基因的过量表达及msn2基因的敲除、以增强曲酸次级代谢水平，增加HMP途径关键酶的表达促进曲酸的合成，提高曲酸产量

为实现上述目的，本发明公开了如下的技术内容：

一株重组米曲霉菌株，其分类为米曲霉Aspergillus oryzae，来自米曲霉自源基因重组米曲霉菌株，保藏号CGMCC No.18557（中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC）。保藏日期2019年10月8日。在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（China General Microbiological Cultuer Collection Centre）进行保藏，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101。