[发明专利]一种桔霉素含量的检测方法有效
申请号: | 202010999108.1 | 申请日: | 2020-09-22 |
公开(公告)号: | CN112098559B | 公开(公告)日: | 2021-12-28 |
发明(设计)人: | 倪莉;周康熙;肖炎钦;吕旭聪 | 申请(专利权)人: | 福州大学 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/34;G01N30/86 |
代理公司: | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人: | 饶文君;蔡学俊 |
地址: | 350108 福建省福州市*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 霉素 含量 检测 方法 | ||
本发明公开了一种桔霉素的测定方法,采用外标法测定桔霉素的含量,步骤如下:(1)配置一定浓度梯度的桔霉素标准溶液,用液相色谱绘制浓度‑峰面积的标准曲线;(2)将样品溶液过0.22μm滤膜后采用液相色谱法进行测定,并根据(1)中的标准曲线计算浓度。本发明所述的桔霉素测定方法适用于红曲霉发酵液、红曲提取液、麦曲黄酒或红曲黄酒中桔霉素的检测,最低检出限和定量限分别为3ng/mL和10ng/mL,在10~1000ng/mL范围内线性良好,能克服红曲霉产生的其他荧光物质的干扰。
技术领域
本发明属于桔霉素的测定技术领域,具体涉及一种桔霉素含量的检测方法。
背景技术
红曲由红曲霉接种发酵而得,红曲又能作为发酵剂用于红曲黄酒的酿造。红曲霉是一类小型丝状腐生真菌,其初级代谢产物(如淀粉酶、蛋白酶等)和次级代谢产物(如红曲色素、洛伐他汀等)在食品医药领域应用广泛,但其生长过程中可能会代谢具有肾毒性的桔霉素,因此桔霉素含量的检测和控制尤为重要。中国轻工业行业标准QB/T 2847-2007对功能性红曲米(粉)的桔霉素限量为50μg/kg(50ppb),日本限量为100ppb,美国食品和药物管理局FDA对其限量为20ppb。已废止的旧国标(GB/T 5009.222-2008红曲类产品中桔青霉素的测定)定量限液态样品为50ng/mL,固态样品为1000μg/kg,准确性欠佳,只能对桔霉素超标的样品进行定量分析;而新国标(GB 5009.222-2016 食品中桔青霉素的测定)法一中红曲类产品桔青霉素的测定的检测方法虽然灵敏度高(检出限25μg/kg),但需要用到价格高昂的免疫亲和柱,且HPLC方法可能会导致标品出峰拖尾,不利于红曲类产品的桔霉素检测。针对新旧国标中关于桔霉素HPLC检测方法的缺陷,本发明提供了一种有效准确测定的方法。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术不足,提供一种桔霉素含量的检测方法。
为实现上述目的,本发明采用如下技术方案:
一种桔霉素含量的测定方法:采用外标法测定桔霉素的含量。配置一定浓度梯度的桔霉素标准溶液,用液相色谱绘制浓度-峰面积的标准曲线;将样品溶液过0.22μm滤膜后采用液相色谱法进行测定,并根据标准曲线计算浓度。所述的样品溶液为红曲霉发酵液、红曲提取液、麦曲黄酒或红曲黄酒中的一种。
(1)桔霉素标准溶液的配置方法:在电子分析天平中准确称取1mg桔霉素,加入10mL75%乙醇充分溶解,配置成100μg/mL桔霉素储备液,分装成10管,取其中一管用75%乙醇稀释成1000ng/mL、500ng/mL、250ng/mL、100ng/mL、50ng/mL、25ng/mL的桔霉素标准溶液,其余储备液于-80℃冻存。桔霉素标准溶液现配现用,桔霉素储备液可保藏1年。
(2)液相色谱的检测条件为:色谱柱:Agilent Zorbax SB-C18(4.6×250mm,5μ),激发波长331nm,发射波长500nm,进样量20μL,流速1.0mL/min,检测时间15min,流动相为A液为100%甲醇,B液为同时含有0.02%(v/v)三乙胺、0.32%(v/v)四氢呋喃和0.1%(v/v)磷酸的水溶液,C液为含有0.1%(v/v)甲酸的乙腈,流动相的洗脱梯度如表1所示。
表1 液相流动相的洗脱梯度条件
本发明的有益效果在于:
本发明所述的方法能够将桔霉素与红曲霉代谢的荧光类物质相分离,适用于红曲霉发酵液、红曲和黄酒类产品中桔霉素的检测,相比于2008年桔霉素检测的旧国标提高了检测灵敏度,相比于2016年桔霉素检测的新国标HPLC方法(法一中适用于红曲类产品的检测方法)桔霉素的出峰时间更早,峰形更加完善,不拖尾,方法准确可行,可信度高。
附图说明
图1为本发明中500ng/mL桔霉素标品的液相色谱图。
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