[发明专利]一种骨诱导活性提取物及其制备方法

权利要求书

1.一种制备骨诱导活性提取物的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)粉碎：将皮质骨块进行低温粉碎形成皮质骨粒；

(2)脱脂：在反应器中加入皮质骨粒，再加入相当于皮质骨粒重量0.3倍的甲醇、0.7倍的三氯甲烷，室温下反应后过滤得到脱脂后的皮质骨粒；

(3)脱钙：将步骤(2)得到的脱脂后的皮质骨粒完全浸泡于脱钙液中，室温下进行超声反应，过滤后得到脱钙后的皮质骨粒；

(4)脱杂蛋白：将步骤(3)得到的脱钙后的皮质骨粒依次浸泡于氯化钙溶液、EDTA·2Na溶液、氯化锂溶液、磷酸二氢钠水溶液中进行反应，过滤后得到脱杂蛋白后的皮质骨粒；

(5)抽提：将步骤(4)得到的脱杂蛋白后的皮质骨粒加入到抽提液中，室温下超声反应得抽提液，浓缩抽提液，将浓缩后的抽提液室温下透析；

(6)离心干燥：将透析完成的抽提液进行离心，离心得到的沉淀物用分散液进行分散，室温下进行透析，将透析得到的混合物离心，离心后的沉淀物干燥后得到骨诱导活性提取物。

2.根据权利要求1所述的一种骨诱导活性提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中使用液氮保持温度不大于-20℃。

3.根据权利要求1所述的一种骨诱导活性提取物的制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述脱钙液为0.4mol/L-0.8mol/L的盐酸。

4.根据权利要求1所述的一种骨诱导活性提取物的制备方法，其特征在于：步骤(5)中所述抽提液的配制方法为：将尿素0.3-0.6g，氯化钙100-150g，a-硫辛酸5-15g，盐酸胍30-60g加入水中搅拌直至溶解，用水稀释至1L，然后加入N-乙基马来酰亚胺1-1.5g，得到所述抽提液。

5.一种由权利要求1-4任一项制备方法制备得到的骨诱导活性提取物，其特征在于：

包括以质量百分数计的如下组分：

6.根据权利要求5所述的一种骨诱导活性提取物，其特征在于：所述促进剂包含占所述骨诱导活性提取物如下质量百分比的组分：分子量为50-90kDa的内质网伴侣结合蛋白0.05-0.2％；分子量为20-50kDa的胰岛素样生长因子0.02-0.1％；分子量为50-100kDa的血清转铁蛋白0.4-1.7％；分子量为30-140kDa的钙结合蛋白0.2-1.2％；分子量为30-70kDa的维生素D结合蛋白0.2-0.9％；分子量为30-70kDa的转化生长因子0.04-0.2％。

7.根据权利要求5所述的一种骨诱导活性提取物，其特征在于：所述诱导剂包含占所述骨诱导活性提取物如下质量百分比的组分：分子量为31-69kDa的骨调蛋白0.02-0.15％；分子量为29-96kDa的骨形态生成蛋白0.04-0.8％；分子量为62-147kDa的骨膜蛋白0.7-7.6％；分子量为25-78kDa的软骨蛋白1.8-15.3％。

8.根据权利要求5所述的一种骨诱导活性提取物，其特征在于：所述活化剂包含占所述骨诱导活性提取物如下质量百分比的组分：分子量为100-200kDa的固生蛋白0.1-1.5％；分子量为15-40kDa的a-晶体蛋白0.05-0.2％；分子量为100-200kDa的丝裂原活化蛋白激酶0.02-0.15％；分子量为20-100kDa的热休克蛋白1-5％；分子量为30-50kDa的基膜聚糖0.05-2％；分子量为5-30kDa的组蛋白8-15％；分子量为30-60kDa的双糖链蛋白聚糖2-5％。

9.根据权利要求5所述的一种骨诱导活性提取物，其特征在于：所述调节剂包含占所述骨诱导活性提取物如下质量百分比的组分：分子量为50-90kDa的核纤层蛋白0.5-2％；分子量为30-80kDa的波形蛋白3.4-15.7％；分子量为71-380kDa的胶原蛋白10.5-27.7％；分子量为10-30kDa的基质Gla蛋白1-5％；分子量为20-60kDa的载脂蛋白1-6％。

10.根据权利要求5所述的一种骨诱导活性提取物，其特征在于：所述抑菌剂包含占所述骨诱导活性提取物如下质量百分比的组分：分子量为20-50kDa的四联素0.5-3.5％；分子量为15-40kDa的溶菌酶0.05-0.3％。