[发明专利]一种骨诱导活性提取物及其制备方法

说明书

本发明创造提供了一种骨诱导活性提取物的制备方法及制备出的骨诱导活性提取物，骨诱导活性提取物包括以质量百分数计的如下组分：促进剂0.91‑4.3％；诱导剂2.56‑23.85％；活化剂11.22‑28.85％；调节剂16.4‑56.4％；抑菌剂0.55‑3.8％，还提供了该骨诱导活性提取物的制备方法。本发明创造所述的骨诱导活性提取物及其制备方法生产周期短，生产成本低，适合工业化大规模生产，可应用于骨修复材料，更好的提高骨修复材料的骨诱导成骨活性，应用于临床治疗骨不连、骨延迟愈合、骨不愈合有显著作用。

技术领域

本发明创造属于骨修复材料制备领域，尤其是涉及一种骨诱导活性提取物及其制备方法。

背景技术

临床上，由于骨创伤、骨肿瘤或其他手术引起的骨缺损、骨不连、骨不愈合的修复治疗需要使用骨修复材料。临床希望的骨修复材料是可以起到支撑和填充作用，且能够以合适的速度进行降解，在合适的三维网状结构和一定的诱导因素下，能有血管长入，自体骨形成，从而爬行替代骨修复材料。整个过程不希望有异物占位、排异等反应。

自体骨移植生物相容性良好，生物活性优良，但取材有限也造成新的损伤、缺损和疼痛。异种骨来源丰富，易于大量获取和库存，且避免了使用同种异种骨可能发生的交叉感染。随着分子生物学技术的发展，获取高活性诱导成骨组合物也日趋成熟。经处理的异种骨修复材料，来源丰富，骨结构与人类骨结构相似，具有一定骨生物活性，是临床一直使用的反应良好的骨修复材料。

异种骨移植的研究有近百年的历史，但如何消除异种骨抗原性同时保持其诱导成骨活性一直是悬而未决的难题。多年来人们尝试了许多方法如脱钙、冷冻、冻干以及煮沸、辐照脱蛋白等，均未取得满意效果。作为骨修复材料，诱导成骨活性组合物配合一定的载体支架材料，易于降解吸收，具有生物组织相容性。首先，它所具有的的天然的多孔结构，微孔规则，孔径适合活性物质及叶间组织长入，这是人工骨等材料不能媲美的和达到的。另外就是源自异种骨的活性组合物作为一种生物组织，和宿主骨骼具有同源性结构排列，因而易于为受体组织细胞接近而吸收清除。此外，经过了一系列的化学处理已基本清除了异种骨松质的抗原性，移植后不会引起免疫反应。

Urist的美国专利4294753公开了一种制备骨形态发生或生成蛋白的制备方法，这种方法是从脱钙骨基质中提取骨形态发生或生成蛋白的主要方法，但该方法的产率极低，获得相同活性的物质成本较高，制备周期较长，工业化生产较难。

骨骼技术股份有限公司申请的公开号为CN101365499A的专利公开了一种骨基质组合物和方法，其中，骨诱导因子包括非胶原蛋白、且是从用于骨脱矿质的酸中回收的。其公开的组合物还包括生物学活性剂，成分种类较多较复杂，制备过程中使用了较大量的稀酸溶液和蛋白酶，增加了生产成本。

发明内容

有鉴于此，本发明创造旨在提出一种骨诱导活性提取物及其制备方法，生产周期短，生产成本低，适合工业化大规模生产，可应用于骨修复材料，更好的提高骨修复材料的骨诱导成骨活性，应用于临床治疗骨不连、骨延迟愈合、骨不愈合有显著作用。

为达到上述目的，本发明创造的技术方案是这样实现的：

一种骨诱导活性提取物的制备方法，包括如下步骤：

(1)粉碎：将皮质骨块进行低温粉碎形成皮质骨粒；

进一步的，所述步骤(1)中使用液氮保持温度不高于-20℃。

(2)脱脂：在反应器中加入皮质骨粒，再加入相当于皮质骨粒重量0.3倍的甲醇、0.7倍的三氯甲烷，室温下反应后过滤得到脱脂后的皮质骨粒；

进一步的，所述脱脂步骤中室温下反应5-10h。

进一步的，所述脱脂步骤可重复进行多次。

(3)脱钙：将步骤(2)得到的脱脂后的皮质骨粒完全浸泡于脱钙液中，室温下进行超声反应，过滤后得到脱钙后的皮质骨粒；