[发明专利]高产核苷的枯草芽孢杆菌工程菌及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 202011003905.6 | 申请日： | 2020-09-22 |
| 公开（公告）号： | CN112143751B | 公开（公告）日： | 2022-05-06 |
| 发明（设计）人： | 孙莹莹;胡丹;白立宽;吴涛 | 申请（专利权）人： | 廊坊梅花生物技术开发有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/75 | 分类号： | C12N15/75;C12N15/90;C12N15/67;C12N15/52;C12N15/60;C12P19/40;C12N1/21;C12R1/125 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 黄爽 |
| 地址： | 065001 河北省*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 高产 核苷 枯草 芽孢 杆菌 工程 及其 构建 方法 应用 | ||
1.发酵生产核苷的方法或提高核苷发酵产量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)增强枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)染色体上编码NCBI参考序列WP_009967365.1的谷氨酸合酶基因gltB；和/或
增强枯草芽孢杆菌染色体上编码NCBI参考序列WP_003231737.1的谷氨酰胺合成酶基因glnA；
(2)将步骤(1)获得的基因增强菌株用于核苷的发酵生产；
通过点突变增强谷氨酸合酶基因gltB，使其编码的谷氨酸合酶的第1181位丙氨酸突变为缬氨酸；和/或
通过将强启动子与谷氨酸合酶基因gltB可操作地连接而增强；和/或
通过将强启动子与谷氨酰胺合成酶基因glnA可操作地连接而增强；
所述强启动子为来自枯草芽孢杆菌cdd基因的P43；
所述枯草芽孢杆菌为B.subtilis A5。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核苷选自腺苷、肌苷、鸟苷中的至少一种。
3.高产核苷的枯草芽孢杆菌工程菌，其特征在于，所述工程菌是通过增强枯草芽孢杆菌染色体上编码NCBI参考序列WP_009967365.1的谷氨酸合酶基因gltB和/或编码NCBI参考序列WP_003231737.1的谷氨酰胺合成酶基因glnA，获得的基因增强菌株；
增强的途径选自以下a)～c)，或任选的组合：
a)通过点突变增强谷氨酸合酶基因gltB，使其编码的谷氨酸合酶的第1181位丙氨酸突变为缬氨酸；
b)通过将强启动子与谷氨酸合酶基因gltB可操作地连接；
c)通过将强启动子与谷氨酰胺合成酶基因glnA可操作地连接；
所述强启动子为来自枯草芽孢杆菌cdd基因的P43；
所述枯草芽孢杆菌为B.subtilis A5。
4.高产核苷的枯草芽孢杆菌工程菌的构建方法，其特征在于，包括：利用基因工程手段增强枯草芽孢杆菌染色体上编码NCBI参考序列WP_009967365.1的谷氨酸合酶基因gltB和/或编码NCBI参考序列WP_003231737.1的谷氨酰胺合成酶基因glnA，获得基因增强菌株；
增强的途径选自以下a)～c)，或任选的组合：
a)通过点突变增强谷氨酸合酶基因gltB，使其编码的谷氨酸合酶的第1181位丙氨酸突变为缬氨酸；
b)通过将强启动子与谷氨酸合酶基因gltB可操作地连接；
c)通过将强启动子与谷氨酰胺合成酶基因glnA可操作地连接；
所述强启动子是来自枯草芽孢杆菌cdd基因的P43启动子；
所述枯草芽孢杆菌为B.subtilis A5。
5.权利要求3所述的工程菌或按照权利要求4所述方法构建的工程菌在发酵生产核苷中的应用；
所述核苷选自腺苷、肌苷、鸟苷中的至少一种。
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