[发明专利]提高单链DNA连接效率的方法有效
| 申请号： | 202011011345.9 | 申请日： | 2020-09-23 |
| 公开（公告）号： | CN112111544B | 公开（公告）日： | 2022-04-01 |
| 发明（设计）人： | 顾宏周;李青婷 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属肿瘤医院 |
| 主分类号： | C12P19/34 | 分类号： | C12P19/34 |
| 代理公司： | 上海容慧专利代理事务所(普通合伙) 31287 | 代理人： | 于晓菁 |
| 地址： | 200032 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 提高 dna 连接 效率 方法 | ||
1.一种提高单链DNA连接效率的方法，其特征在于，在单链DNA的5’-磷酸基末端和单链DNA的3’羟基末端设计二级结构；
所述二级结构为：所述5’-磷酸基末端的核苷酸序列与所述3’羟基末端的核苷酸序列互补配对；
所述二级结构中，所述5’-磷酸基末端的核苷酸序列与所述3’羟基末端的核苷酸序列之间含有10bp-35bp碱基互补配对；
所述单链DNA距离5’-磷酸基末端和距离3’羟基末端的前3-6个碱基不参与配对；
通过CircLigase酶连接单链DNA。
2.一种提高单链DNA连接效率的方法，其特征在于，在单链DNA的5’-磷酸基末端和单链DNA的3’羟基末端设计二级结构；
所述二级结构由单链DNA的5’-磷酸基末端、单链DNA的3’羟基末端与接头DNA组成，所述接头DNA的核苷酸序列分别与所述5’-磷酸基末端的核苷酸序列、所述3’羟基末端的核苷酸序列互补配对；
所述二级结构中，所述5’-磷酸基末端的核苷酸序列与所述3’羟基末端的核苷酸序列之间含有10bp-35bp碱基互补配对；
所述单链DNA距离5’-磷酸基末端和距离3’羟基末端的前3-6个碱基不参与配对；
所述二级结构中，所述5’-磷酸基末端的核苷酸序列与所述接头DNA之间、所述3’羟基末端的核苷酸序列与所述接头DNA之间分别含有10bp-35bp碱基互补配对；
通过CircLigase酶连接单链DNA。
3.根据权利要求1或2所述的提高单链DNA连接效率的方法，其特征在于，所述5’-磷酸基末端和所述3’-羟基末端由同一条单链DNA提供，所述单链DNA连接为分子内连接。
4.根据权利要求1或2所述的提高单链DNA连接效率的方法，其特征在于，所述5’-磷酸基末端和所述3’-羟基末端由两条单链DNA分别提供，所述单链DNA连接为分子间连接。
5.根据权利要求1或2所述的提高单链DNA连接效率的方法，其特征在于，所述单链DNA是不小于100nt的核苷酸序列。
6.根据权利要求1或2所述的提高单链DNA连接效率的方法，其特征在于，所述单链DNA是不小于120nt的核苷酸序列。
7.根据权利要求1或2所述的提高单链DNA连接效率的方法，其特征在于，所述接头DNA是含有20-70nt的核苷酸序列。
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