[发明专利]一种液相色谱串联质谱定量检测蜂毒肽的方法

权利要求书

1.一种液相色谱串联质谱定量检测蜂毒肽的方法，其特征在于，包括：通过液相色谱串联质谱法，采用同位素内标法在待测样本中对蜂毒肽的特征肽段进行定量检测；

所述特征肽段的序列如下: VLTTGLPALISWIK；特征肽段在质谱中所产生的检测信号的母离子为m/z756. 46343([M+2H] 2+)；子离子图谱中包含碎片离子m/z 927. 56409、m/z585. 35938；

所使用的内标肽段为：VLTTGLPALISWIK*，其中，K*表示赖氨酸中的碳置换为¹³C，氮置换为¹⁵N；内标肽段在质谱中所产生的检测信号的母离子为m/z 761.47835；子离子包含m/z935.60406和m/z 593.43632；其允许偏差应在10 ppm以内；

待测样本的前处理包括：对待测样本中的蛋白进行提取，采用胰蛋白酶对所述蛋白进行酶解，对酶解产物进行除盐后，用0.1%甲酸溶液复溶；

液相色谱条件如下：

色谱柱：C18柱；

流动相组成：

流动相A为0.1%甲酸水溶液，流动相B为含0.1%甲酸的乙腈；梯度洗脱条件为：0-1.0min，5%流动相B；1.0-2.0 min，5-15%流动相B；2.0-12.0 min，15-40%流动相B；12.0-14.0min，40-95%流动相B；14.0-16.5 min，95%流动相B；16.0-17.5 min，5%流动相B；

流速：0.30 mL/min；

进样量：5.0 µL；

柱温：40 ℃；

质谱条件如下：离子源参数：鞘气的流速38 arb；辅助气的流速15 arb；挡锥气的流速0arb；电喷雾电压3.2 kV；离子导管的温度275 ℃；S-lens RF level设为60；离子源温度380℃；采集的模式为正离子模式下的Full MS-ddMS²。

2.一种用于检测蜂毒肽的试剂盒，其特征在于，标准物质包括序列为VLTTGLPALISWIK的特征肽段。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述标准物质还包括所述特征肽段的内标肽段，所述内标肽段为：VLTTGLPALISWIK*，其中，K*表示赖氨酸中的碳置换为¹³C，氮置换为¹⁵N。