[发明专利]枯草芽孢杆菌黑色变种培养基及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌黑色变种培养基，其特征在于，所述培养基的每1000mL体系中，培养基组成包括：胰蛋白胨0.5～4.0g，葡萄糖0.5～2.0g，氯化钠0.5～1.0g，磷酸氢二钾0.5～1.0g，七水硫酸镁0.5～1.0g，L-天冬酰胺0.5～1.0g，L-酪氨酸0.5～1.0g，干酪素溶液10mL～60mL，微量盐溶液1～2mL，琼脂18～20g，余量为蒸馏水。

2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌黑色变种培养基，其特征在于，所述培养基的每1000mL体系中，培养基组成包括：胰蛋白胨0.5g，葡萄糖0.5g，氯化钠0.5g，磷酸氢二钾0.5g，七水硫酸镁0.5g，L-天冬酰胺1.0g，L-酪氨酸0.5g，干酪素溶液10ml，微量盐溶液1mL，琼脂20g，余量为蒸馏水。

3.根据权利要求1或2所述的枯草芽孢杆菌黑色变种培养基，其特征在于，所述干酪素溶液单独配置，干酪素溶液的每100mL体系如下：干酪素5.0g，溶剂为0.1mol/L NaOH；将干酪素加入溶剂后加热溶解得到。

4.根据权利要求1或2所述的枯草芽孢杆菌黑色变种培养基，其特征在于，所述微量盐溶液单独配置，微量盐溶液的每1000mL体系如下：七水合硫酸亚铁1.0～2.0g，二水合氯化铜0.01～0.05g，六水合氯化钴0.01～0.05g，二水合钼酸钠0.01～0.05g，氯化锌0.01～0.02g，硼酸2.0～3.0g，四水合二氯化锰1.0～2.0g，酒石酸钠1.0～2.0g，余量为蒸馏水。

5.根据权利要求4所述的枯草芽孢杆菌黑色变种培养基，其特征在于，所述微量盐溶液的每1000mL体系如下：七水合硫酸亚铁1.360g，二水合氯化铜0.027g，六水合氯化钴0.040g，二水合钼酸钠0.025g，氯化锌0.020g，硼酸2.850g，四水合二氯化锰1.800g，酒石酸钠1.770g，余量为蒸馏水。

6.一种制备权利要求1所述的枯草芽孢杆菌黑色变种培养基的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)准备原料：按配比，称取胰蛋白胨、葡萄糖、氯化钠、磷酸氢二钾、七水硫酸镁、L-天冬酰胺、L-酪氨酸、琼脂，量取微量盐溶液和干酪素溶液，所述微量盐溶液和干酪素溶液提前单独配置好；

(2)配置：在蒸馏水中，将步骤(1)中的原料按照胰蛋白胨、葡萄糖、氯化钠、磷酸氢二钾、七水硫酸镁、L-天冬酰胺、L-酪氨酸、琼脂、微量盐溶液和干酪素溶液的顺序逐一加入，待每一种原料溶解后加下一个原料，然后使用质量浓度为100g/L的NaOH或质量浓度为100g/L的HCl调节体系pH至7.0±0.2；将体系在115℃～121℃灭菌15min～30min后得到枯草芽孢杆菌黑色变种培养基。

7.一种利用权利要求1所述的枯草芽孢杆菌黑色变种培养基在诱导产生稳定黑色素中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述诱导产生稳定黑色素的方法包括以下步骤：

(1)将配置好的枯草芽孢杆菌黑色变种培养基倒入无菌培养皿，每皿25～30ml，冷却凝固后待用；

(2)将枯草芽孢杆菌黑色变种菌株在步骤(1)准备好的培养基上划线或涂布接种，在培养基上得到稳定的黑色菌落；

(3)挑取培养基上培养得到的黑色菌落后提取其中的黑色素。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌黑色变种菌株为B.subtilis var.niger ATCC 9372。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述步骤(2)中，培养条件为36℃±1℃增殖培养72h～96h。