[发明专利]枯草芽孢杆菌黑色变种培养基及其制备方法与应用

说明书

本发明提供了一种枯草芽孢杆菌黑色变种培养基及其制备方法与应用，所述培养基的每1000mL体系中，培养基组成包括：胰蛋白胨0.5～4.0g，葡萄糖0.5～2.0g，氯化钠0.5～1.0g，磷酸氢二钾0.5～1.0g，七水硫酸镁0.5～1.0g，L‑天冬酰胺0.5～1.0g，L‑酪氨酸0.5～1.0g，干酪素溶液10mL～60mL，微量盐溶液1～2mL，琼脂18～20g，余量为蒸馏水。本发明的枯草芽孢杆菌黑色变种培养基，诱导作用强，市面上枯草芽孢杆菌黑色变种产品均适用，而且在诱导产生稳定黑色素时，该培养基操作简单，成本低，筛选效果强，还为其芽孢的配置应用提供菌种保障。

技术领域

本发明涉及微生物，具体地，涉及一种枯草芽孢杆菌黑色变种培养基及其制备方法和应用，尤其是一种枯草芽孢杆菌黑色变种产生稳定色素的诱导培养基及其配置和使用方法。

背景技术

枯草芽孢杆菌黑色变种(Baci llus subtil is var.niger)，国际上称为萎缩芽孢杆菌，非致病菌，枯草芽孢杆菌的一个亚种。革兰氏阳性芽孢杆菌，长2.0～4.0μm，宽0.5～1.0μm，单个或呈短链状排列，芽孢椭圆形，中生，不膨大。

枯草芽孢杆菌黑色变种因能产生对热、紫外线、电离辐射和某些化学物质很强抗性的芽孢，可以作为消毒剂检测及灭菌质量控制方面的质量控制标准菌株进行应用。《美国药典》将枯草芽孢杆菌黑色变种作为干热消毒、环氧乙烷控制的生物指示剂及用于医药物品消毒与无菌保证；《欧洲药典》将其作为杀菌法的生物指示剂；我国在《中国药典》、《消毒与灭菌效果的评价方法与标准》(GB 15981-1995)、《消毒技术规范》均将枯草芽孢杆菌黑色变种作为消毒灭菌指示微生物；英国、瑞士等国标准协会在健康产品相关的标准或与医疗器械相关的标准中已将该菌株作为环氧乙烷灭菌、干热灭菌和其它液体化学消毒剂的指示剂。

根据相关资料，枯草芽孢杆菌黑色变种在含有酪氨酸的培养基上可产生黑色菌落，但是黑色素形成十分不稳定。目前，尚无枯草芽孢杆菌黑色变种能产生稳定色素的培养基，因此，探索一种便捷、可靠、稳定的使枯草芽孢杆菌黑色变种产生黑色素的诱导培养基十分必要。

申请公布号为CN 105670964 A的发明公开了萎缩芽孢杆菌BsR05菌株及其应用。萎缩芽孢杆菌BsR05菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCCNO.11665。采用本发明菌株制备的萎缩芽孢杆菌BsR05的液体悬浮剂对黄瓜灰霉病具有特异的防治作用，防效高平均防效在70％以上。该萎缩芽孢杆菌产生黑色素量少不稳定。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明提供一种枯草芽孢杆菌黑色变种培养基及其制备方法和应用。

本发明的第一方面提供一种枯草芽孢杆菌黑色变种培养基，所述培养基的每1000mL体系中，培养基组成包括：胰蛋白胨0.5～4.0g，葡萄糖0.5～2.0g，氯化钠0.5～1.0g，磷酸氢二钾0.5～1.0g，七水硫酸镁0.5～1.0g，L-天冬酰胺0.5～1.0g，L-酪氨酸0.5～1.0g，干酪素溶液10mL～60mL，微量盐溶液1～2mL，琼脂18～20g，余量为蒸馏水。

优选地，所述培养基的每1000mL体系中，培养基组成包括：胰蛋白胨0.5g，葡萄糖0.5g，氯化钠0.5g，磷酸氢二钾0.5g，七水硫酸镁0.5g，L-天冬酰胺1.0g，L-酪氨酸0.5g，干酪素溶液10ml，微量盐溶液1mL，琼脂20g，余量为蒸馏水。

优选地，所述干酪素溶液单独配置，干酪素溶液的每100mL体系如下：干酪素5.0g，溶剂为0.1mol/L NaOH；将干酪素加入溶剂后加热溶解得到。