[发明专利]一种用于识别磷脂酰胆碱链长异构体的质谱分析方法

权利要求书

1.一种用于识别磷脂酰胆碱链长异构体的质谱分析方法，其特征在于：包括以下步骤：

构建磷脂酰胆碱链长异构体及特征离子高分辨质谱模拟数据库，所述磷脂酰胆碱链长异构体及特征离子高分辨质谱模拟数据库特征为：按照磷脂酰胆碱质谱裂解规律，对磷脂酰胆碱链长异构体化合物模拟数据库中每一个磷脂酰胆碱分子，都生成相应的二级质谱和三级质谱碎片的精确质量数，并计算理论分子量，由此构建包含磷脂酰胆碱分子、分子式、分子量、二级和三级质谱碎片结构式和精确质量数的模拟数据库；

建立液相色谱-高分辨质谱联用仪磷脂酰胆碱识别方法，将待检测样品进行液相色谱-高分辨质谱联用检测，根据磷脂酰胆碱正离子和负离子三级碎片离子精确质量数质谱特征，和模拟数据库比对进行质谱分析，获得磷脂酰胆碱链长异构体的识别结果，具体为：分别在正离子模式和负离子模式两种扫描模式下采集质谱信息，在正离子扫描模式下，磷脂酰胆碱类脂质在一级质谱中均产生母离子[M+H]⁺即MS₁，在二级质谱图中产生磷脂酰胆碱的磷酸头基的特征碎片[Head+OH+H]⁺即MS₂，在三级质谱图中产生特征碎片[Head+H+OH-N(CH₃)₃]⁺即MS₃；在负离子模式下，具有磷酸头基的磷脂酰胆碱生成母离子为[M+HCOO]^-即MS₁，在二级质谱图中，产生[R₁COO]^-、[R₂COO]^-、[M-R₁CO]^-、[M-R₂CO]^-，以及与磷酸头基相关的结构碎片即MS₂；结合在正离子模式下MS₁的质谱碎片离子[M+H]⁺得到唯一的分子式，进一步结合MS₂和MS₃的碎片离子质谱图，识别磷脂酰胆碱区别于其他类型磷脂的特征，分析其是否为磷脂酰胆碱；然后结合负离子模式下的MS₁，进一步证明磷脂酰胆碱的唯一分子式，结合MS₂的质谱碎片离子，识别磷脂酰胆碱链长异构体，对磷脂酰胆碱的磷酸头基上连接的脂肪酸进行识别，获得磷脂酰胆碱链长异构体的识别结果，

其中：磷脂酰胆碱的结构式如下图：

磷脂酰胆碱的磷酸头基为：

。

2.根据权利要求1所述的质谱分析方法，其特征在于：液相色谱-高分辨质谱联用检测中的质谱检测条件：二级碰撞能量CE为30～40eV，采集待检测样品在高分辨质谱中的多级质谱数据。

3.根据权利要求1所述的质谱分析方法，其特征在于：质谱检测中使用的二级、三级碎裂方式为HCD。

4. 根据权利要求1所述的质谱分析方法，其特征在于：液相色谱-高分辨质谱联用检测中的液相色谱检测条件：流动相A为5/5～7/3，v/v的乙腈/水混合溶液，含0.05～0.15%甲酸，8～12mmol/L甲酸铵；流动相B为85/15～95/5，v/v的异丙醇/乙腈混合溶液，含0.05～0.15%甲酸，8～12mmol/L甲酸铵，洗脱梯度为: 0 min，10～20 %B；4 min，20～40 %B；5min，45～50 %B；22 min，80～85 % B；23-24 min，98～99 %B；24.2-30 min，10～20 %B。

5.根据权利要求1所述的质谱分析方法，其特征在于：液相色谱检测中使用的流动相中含有甲酸和甲酸铵，甲酸按体积百分比用量为0.05-0.15%，甲酸铵的用量为8-12mmol/L。