[发明专利]包含免疫细胞的药物组合物用于治疗癌症

权利要求书

1.一种药物组合物，其含有单克隆抗体以及提取的免疫细胞，所述的免疫细胞为采用下述方法制备得到：

(a)将刺激因子包被培养瓶；其中刺激因子由IL-2浓度5000IU/mL、IFN-γ浓度5000IU/mL、IL-15浓度2000IU/mL、GM-CSF浓度2000IU/mL、IL-4浓度750IU/mL、TNF-α浓度1000IU/mL以生理盐水配置组成；

(b)将血液采用密度梯度离心法分离单个核细胞；

(c)在刺激因子包被的培养瓶中添加含有亚油酸2mg/L，氨基酸20mg/L，维生素50mg/L、IL-2浓度5000IU/mL、IFN-γ浓度5000IU/mL的RPMI 1640培养基，再将单个核细胞接种于刺激因子包被的培养瓶中在37℃、二氧化碳浓度5％条件下进行培养，其中单个核细胞的接种浓度为5×10⁶个/ml；

(d)待培养3天后，将单个核细胞移入空培养瓶中，再向空培养瓶中添加含有亚油酸2mg/L，氨基酸20mg/L，维生素50mg/L、IL-2浓度5000IU/mL、IFN-γ浓度5000IU/mL的RPMI1640培养基继续在37℃、二氧化碳浓度5％条件下进行培养；

(e)待培养7天后，将单个核细胞移入培养袋中，再向培养袋中添加含有亚油酸2mg/L，氨基酸20mg/L，维生素50mg/L、IL-2浓度5000IU/mL、IFN-γ浓度5000IU/mL的RPMI 1640培养基在37℃、二氧化碳浓度5％条件下进行培养，待培养15天后，收集单个核细胞即为所述的免疫细胞；

所述的单克隆抗体为特异性的PD-L1单克隆抗体4-G3，

4-G3的重链可变区序列如SEQ ID NO：1所示；

4-G3的轻链可变区序列如SEQ ID NO：2所示。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：该药物组合物可制成静脉内，皮下，腹膜内，肌肉内，口服，鼻，肺，眼，阴道或直肠给药。

3.如权利要求1所述的药物组合物，其中药物组合物的剂型为溶液，悬浮液，乳剂，脂质体制剂。

4.如权利要求1所述的药物组合物，其中在药物组合物中包括等渗剂，所述等渗剂选自糖，甘露醇，山梨醇或氯化钠中的一种。

5.权利要求1中所述的单克隆抗体以及免疫细胞在制备用于治疗肝癌的药物组合物中的用途；其中所述免疫细胞为采用下述方法制备得到：

(a)将刺激因子包被培养瓶；其中刺激因子由IL-2浓度5000IU/mL、IFN-γ浓度5000IU/mL、IL-15浓度2000IU/mL、GM-CSF浓度2000IU/mL、IL-4浓度750IU/mL、TNF-α浓度1000IU/mL以生理盐水配置组成；

(b)将血液采用密度梯度离心法分离单个核细胞；

(c)在刺激因子包被的培养瓶中添加含有亚油酸2mg/L，氨基酸20mg/L，维生素50mg/L、IL-2浓度5000IU/mL、IFN-γ浓度5000IU/mL的RPMI 1640培养基，再将单个核细胞接种于刺激因子包被的培养瓶中在37℃、二氧化碳浓度5％条件下进行培养，其中单个核细胞的接种浓度为5×10⁶个/ml；

(d)待培养3天后，将单个核细胞移入空培养瓶中，再向空培养瓶中添加含有亚油酸2mg/L，氨基酸20mg/L，维生素50mg/L、IL-2浓度5000IU/mL、IFN-γ浓度5000IU/mL的RPMI1640培养基继续在37℃、二氧化碳浓度5％条件下进行培养；

(e)待培养7天后，将单个核细胞移入培养袋中，再向培养袋中添加含有亚油酸2mg/L，氨基酸20mg/L，维生素50mg/L、IL-2浓度5000IU/mL、IFN-γ浓度5000IU/mL的RPMI 1640培养基在37℃、二氧化碳浓度5％条件下进行培养，待培养15天后，收集单个核细胞。

6.一种特异性结合PD-L1的单克隆抗体，其特征在于：重链可变区序列如SEQ ID NO：1所示，轻链可变区序列如SEQ ID NO：2所示。