[发明专利]包含免疫细胞的药物组合物用于治疗癌症

说明书

本发明涉及包含免疫细胞的药物组合物用于治疗癌症。本发明制备了特异性针对PD‑L1的单克隆抗体，其具有较好的抑制肝癌细胞增殖的效果，此外，还通过分离以及优化获得了能够抑制肝癌细胞增殖的免疫细胞，通过将免疫细胞与PD‑L1细胞组合使用，可以有效的治疗肝癌，具有协同的作用，具有极好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物制药领域，具体的涉及用于肝癌治疗的领域，更近一步的涉及包含免疫细胞的药物组合物用于治疗癌症。

背景技术

肝细胞癌（HCC）占原发性肝癌的70%～80%，世界范围内是第6 位常见的癌症，术后的复发以及转移引起的死亡排名第3。在亚洲国家尤其是中国和日本，在明确诊断后的数周至数月内死亡率高，5 年生存率小于14%，术后5 年的复发率大于50%，术后5 年生存率只有30%～40%。

随着医学技术的发展，免疫细胞治疗直接识别并杀伤患者血液和淋巴中的肿瘤细胞，在不损伤和破坏机体免疫系统和功能的前提下杀伤患者血液、淋巴中的肿瘤细胞，恢复并增强机体自然抗癌免疫系统。免疫细胞治疗可减轻肝癌患者的放化疗毒副作用，降低患者复发率，延长无进展生存时间和总生存期。

NK( natural killer cell，自然杀伤细胞) 细胞和NKT 细胞是固有免疫细胞的重要组成部分，均从骨髓衍生。在肝脏中定居的NK 细胞发挥宿主免疫作用来有效阻止细胞的肿瘤化。NK 细胞通过分泌细胞因子来调节其他免疫细胞的活性以及发挥细胞毒性。

自然杀伤细胞（NK）占人肝脏内淋巴细胞的25%～40%， 根据CD56 分子的表达量可分为CD56bright 和CD56dim 两个亚群。其中CD56bright 亚群可被IL-2 刺激后扩增，约10%表达杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR），可分泌合成TNF 相关的凋亡诱导配体（TRAIL）；而CD56dim 亚群对IL-2 刺激不敏感，85%的CD56dim 为KIR+，分泌合成穿孔素和颗粒酶B。当HCC 发生时，一方面肝癌细胞表面表达Rae1，该因子作为NK 细胞活化受体NKG2D 的配体可以活化NK 细胞，促使其发挥抗肿瘤免疫的作用。另一方面，NK 细胞的免疫功能受到限制，HCC 患者外周血中CD56dimNK 细胞亚群明显少于健康对照组。同时HCC 患者肿瘤区域中的CD56dimNK 细胞表达的IFN-γ 少于非肿瘤区域，有体外实验表明这与CD4+CD25+调节性T 细胞（Treg）相关。肝癌发生时，细胞外基质微环境的改变、HSC 分泌的TGF-β 等可以抑制NK 细胞活性及功能， 进而使其对肝细胞的监视功能减弱。在正常的生理状态下，NK 细胞通过产生“细胞溶解颗粒”来发挥生理作用，这种颗粒中包含有穿孔素、颗粒酶、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体和INF-γ。NKT 细胞是T 淋巴细胞的一个亚群，细胞功能与T 细胞和NK 细胞相重合，也表达αβT 细胞受体和多种NK细胞受体，是一种IL-4， IFN-γ 和TNF-α等细胞因子的重要分泌源。NK 细胞的抗肿瘤能力与NKG2D 和MICA 的表达水平密切相关。Chen 等证实了蝎毒多肽( PESV) 可通过调节MICA-NKG2D 通路增强NK 细胞的抗肿瘤能力。Jiang等也发现人IL-15 基因修饰的NK 细胞 NKL_IL15) 在HCC 荷瘤小鼠中表现出较强的抑瘤活性。研究显示，RFA可有效激活HCC 患者外周血中NK 细胞的活性。

目前已有研究表明CIK细胞 联合贝伐单抗在体内外对HepG2细胞增殖、侵袭、迁移均有抑制作用，且优于单独治疗组。但是抗体应用仅限于贝伐单抗，成本较高。随着分子生物学、免疫学、基因工程等研究的不断深入，肿瘤的免疫细胞治疗得到了长足的发展和广泛的应用。然而，如何进一步提高疗效，仍然是肿瘤免疫细胞治疗所亟待解决的问题。将单抗与免疫细胞进行组合使用已经显示了治疗法可行性，为肝癌的治疗提供了新手段。但是目前研究较少。

发明内容

本发明克服了现有技术的缺陷，提供了一种免疫细胞联合单抗治疗肝癌的方法。

一方面，本发明提供了一种特异性的PD-L1单克隆抗体4-G3，重链可变区序列为：