[发明专利]一种灵芝酒中42种有效成分的UPC2-PDA-Q-Tof/MS检测方法

权利要求书

1.一种灵芝酒中42种有效成分的UPC2-PDA-Q-Tof/MS检测方法，其特征在于：

首先将灵芝酒待测酒样冷冻干燥成固体，以甲酸-水-甲醇混合溶液溶解后过0.22μm滤膜，经UPC2 BEH柱进行梯度洗脱分离，同时采集UPC2-PDA模式及MS模式数据，ESI正负离子模式下分别监测，将获得的待测样品谱图与标准谱图对比，保留时间相同的即为对应物质，通过MS模式标准曲线线性回归方程对各有效成分进行定量；

包括如下步骤：

步骤1：前处理

将灵芝酒待测酒样冷冻干燥成固体，以甲酸-水-甲醇混合溶液溶解后过0.22μm滤膜；

步骤2：标准品的配制

分别配制1g/L的β-谷甾醇、灵芝醛 A、灵芝酸 S、灵芝醇 A、灵芝酸Y、丹芝醇B、灵芝酸X、灵芝醇 F、硬脂酸、油酸、胡萝卜苷、灵芝马酮、灵芝酮三醇、棕榈酸、灵芝酸 F、灵芝酸C1、灵芝烯酸D、赤芝酸A、灵芝酸 B、灵芝酸 F、灵芝酸 A、灵芝烯酸B、灵芝烯酸A、灵芝酸H甲酯、灵芝酸 C2、灵芝烯酸 C、灵芝烯酸E、灵芝孢子酸A、灵芝酸K、灵芝酸H、灵芝内酯B、灵芝酸C6甲酯、灵芝酸I、灵芝酸G、sinensine、灵芝碱甲、安息香酸、烟酸、甜菜碱、肉毒碱、甘露醇、及赤芝孢子内酯A的标准溶液，溶剂为甲酸-水-甲醇溶液，将42种灵芝有效成分的标准溶液混合并逐级稀释，获得不同浓度的混合标准品溶液；

步骤3：标准谱图与标准曲线的绘制

将步骤2配制的不同浓度的混合标准品溶液进行色谱洗脱分离，利用PDA和MS模式进行采集，获得42种灵芝有效成分标准品的标准谱图，以每种有效成分的峰面积为纵坐标，该标准品的浓度为横坐标，获得相应的标准曲线以及线性回归方程；

步骤4：待测样品的检测

将经步骤1前处理后的待测酒样经UPC2 BEH柱进行梯度洗脱分离，同时采集UPC2-PDA模式及MS模式数据，ESI正负离子模式下分别监测，将获得的待测样品谱图与标准谱图对比，利用保留时间和分子量进行定性，通过标准曲线线性回归方程进行定量；

所述甲酸-水-甲醇混合溶液中，甲酸的浓度为0.4%，甲醇的浓度为94.6%，V/V，余量为水；

色谱条件设置如下：

色谱柱：ACQUITY UPC2，BEH，2.1×50 mm，1.7μm；

进样量：2μL；

柱温：55℃流动相：流动相A CO₂，流动相B为含0.4%甲酸、2%水的甲醇溶液，流速：1.5mL/min；梯度洗脱程序为：初始条件为2%的流动相B，流动相B在2 min内增加至50%，达到50%后保持1.5min，然后0.1min内流动相B返回到2%，重新平衡系统3.0 min；整个循环时间为10.0 min。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于检测条件设置如下：

PDA检测器波长：254nm；

MS模式；

ESI+电离模式条件：毛细管电压：3.0kV；取样锥孔电压：21 V；离子源温度：120℃；脱溶剂温度：450℃；脱溶剂气体流速：1000L/H；参比质量：亮氨酸脑啡呔[M+H]⁺= 556.2766；

ESI-电离模式条件：毛细管电压：2.5kV；取样锥孔电压：21V；离子源温度：120℃；脱溶剂温度：450℃；脱溶剂气体流速：1000L/H；参比质量：亮氨酸脑啡呔[M-H]^- = 554.2615；采集范围：m/z 50~1200。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：

步骤4中，为了确保定性的准确性，通过TIC窗口提取PDA检测数据，利用PDA检测的保留时间、ESI检测的保留时间及分子量三个参考值，对比标准品和样品，以此确保定性的准确性。