[发明专利]一种灵芝酒中42种有效成分的UPC2-PDA-Q-Tof/MS检测方法

说明书

本发明公开了一种灵芝酒中42种有效成分的UPC2‑PDA‑Q‑Tof/MS检测方法，通过标准品的准备、样品前处理、色谱条件、质谱条件和定性定量方法的建立等步骤快速测定42种灵芝有效成分。本发明前处理简单，线性相关系数大于0.99，回收率85％‑115％之间，相对标准偏差在10％以内，说明本发明方法能运用于灵芝酒中有效成分的定性定量分析，可为灵芝酒的质量把控提供重要参考意义。

技术领域

本发明属于功能酒领域，具体涉及一种灵芝酒中42种有效成分的UPC2-PDA-Q-Tof/MS 检测方法。

背景技术

我国酿酒历史悠久，品种繁多，以白酒、果酒和米酒居多，但是这类酒一般度数偏高，过量饮用会对身体产生危害。随着人们对自身健康的关注，各种低度数的药酒应运而生，灵芝酒就是其中之一。灵芝为多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体。灵芝是中医药宝库中的珍品，素有“仙草”之誉。古今药理与临床研究均证明，灵芝确有防病治病、延年益寿之功效。《本草经集注》曰：此六芝皆仙草之类，俗所稀见，族种甚多，形色环异，并载《芝草图》中。现代药理学与临床实践进一步证实了灵芝的药理作用，并证实灵芝多糖是灵芝扶正固本、滋补强壮、延年益寿的主要成分。国内对灵芝的研究颇多，现已探明其化学成分已超过200 种，主要活性成分近白种。

人们将灵芝和酒结合在一起制作灵芝酒，灵芝酒制作简单，同时兼具灵芝的营养成分，长期适量饮用有一定的养生保健作用。然而，在目前灵芝酒的制作过程中，出现了各种各样、五花八门的工艺，有直接浸泡的，有煮酒的，有粉碎浸泡的，有高度、低度浸泡的的，有减压萃取的，还有加菌发酵的，但是各种提取方式对有效成分的提取率差异很大，而且灵芝有效成分种类多，各种物质的溶出情况不尽相同，这也阻碍了灵芝酒的发展。

目前现有资料显示灵芝有效成分的检测方法主要是高效液相色谱法(HPLC)，质谱法，薄层色谱法等，检测通量少，不能整体反应出灵芝有效成分的含量，且效率低，费时。

超临界流体色谱法(Supercritical Fluid Chromatography，SFC)技术是以超临界状态的 CO₂为流动相，在超临界状态下的CO₂，黏度系数较低、传质性能好、分离效率高且绿色环保，这些优势都突破了传统液相色谱局限性。优以超高效合相色谱(UltraPerformance Convergence Chromatography，UPC2)为代表的新型色谱分离技术弥补了这传统色谱的限制，在流动相上将GC和LC技术结合，分离分析能力兼具GC、LC的两项优势。高分辨飞行时间质谱(Time of Flight Mass Spectrometer，TOF)具有分辨率高、速度快、质量上限高、分析通量高等优点，可实现高达几百种物质的采集分析。

发明内容

本发明针对上述现有技术的问题，提供了一种灵芝酒中42种有效成分的 UPC2-PDA-Q-Tof/MS检测方法。本发明方法能够准确、快速、稳定、高效的对灵芝酒中有效成分进行定性定量分析，为灵芝酒的质量把控提供重要参考意义。

本发明灵芝酒中42种有效成分的UPC2-PDA-Q-Tof/MS检测方法，首先将灵芝酒待测酒样冷冻干燥成固体，以甲酸-水-甲醇混合溶液溶解后过0.22μm滤膜，经UPC2 BEH柱进行梯度洗脱分离，同时采集UPC2-PDA模式及MS模式数据，ESI正负离子模式下分别监测，将获得的待测样品谱图与标准谱图对比，保留时间相同的即为对应物质，通过MS模式标准曲线线性回归方程对各有效成分进行定量。

本发明灵芝酒中42种有效成分的UPC2-PDA-Q-Tof/MS检测方法，包括如下步骤：

步骤1：前处理

将灵芝酒待测酒样冷冻干燥成固体，以0.4％甲酸-5％水-94.6％甲醇混合溶液溶解后过 0.22μm滤膜；

步骤2：标准品的配制