[发明专利]一种冷冻保护液及刺参精子超低温冷冻保存方法

说明书

本发明涉及海参种质资源超低温冷冻保存技术领域，尤其涉及一种冷冻保护液、激活剂配方及基于程序降温仪和CASA的仿刺参精子超低温冷冻保存方法。冷冻保护液由稀释液、抗冻剂、添加剂组成；其中，稀释液为自然海水，抗冻剂为非质子极性溶剂中的一种或几种，添加剂为葡萄糖。本方法冻存量大(一批次可冻存多于200mL新鲜刺参精液)，能够精密控制降温过程，解冻后应用效果好，能够解决实际生产中南北雌雄海参不同步成熟和一系列刺参种质退化问题。

技术领域

本发明涉及海参种质资源超低温冷冻保存技术领域，尤其涉及一种冷冻保护液、激活剂配方及基于程序降温仪和CASA的仿刺参精子超低温冷冻保存方法。

背景技术

仿刺参(Apostichopus japonicus)，又名刺参，属棘皮动物门(Echinodermata)，海参纲(Holothuroidea)，楯手目(Aspidochirotida)，刺参科(Stichopodidae)，仿刺参属(Apostichopus)，自然栖息于西太平洋北部，包括俄罗斯远东沿海、日本和韩国沿岸、中国黄渤海海域等，是最常见的海洋高等无脊椎动物。刺参是药食同源的滋补尚品，在我国海域分布的20余种可食用海参中营养品质和经济价值最高，其保健和医药价值自古以来即受到广泛认可。随着刺参市场需求以及产业规模逐年扩大，野生刺参的过度采捕日趋严重，使得野生刺参的资源量和种质质量急剧下降，刺参已被世界自然保护联盟濒危物种红色名录(IUCN Red List of Threatened Species或称IUCN红色名录)评估为濒危(EN)物种；养殖海参亦相继出现了病害频发、养殖成活率低、生长速度慢等一系列种质退化问题，刺参病害的频繁发生，每年造成约30亿元的经济损失，给刺参产业造成了重创，成为制约刺参养殖健康发展的重要瓶颈。近海环境对养殖海参的成活率、质量、产量构成影响，海参养殖本身又对海域环境造成影响，导致环境压力日趋严重，甚至可能造成种参不能正常产卵、排精或精卵活力不够，导致无法育种的严重后果。例如2018年夏季，海滨高温肆虐，持续高温天气比往年提前并持续时间长，辽宁、山东等地的围堰养殖海参在高温、高湿气候的影响下大量死亡，经济和种质资源损失惨重。目前研究人员多采用地理隔离较大的南北海参杂交方法以提高刺参种质质量。但是，由于南北雌雄海参并不同步成熟，以至于在海参杂交过程中均需采用催熟、促排等手段，不仅操作复杂、成本高，而且还会出现因催熟、促排失败而导致杂交无法实现等问题。因此亟待解决刺参优质种质资源的保存问题。