[发明专利]一种超声波快速合成司美格鲁肽的方法

说明书

本发明涉及多肽合成领域，具体为一种超声波快速合成司美格鲁肽的方法，包括以下步骤：(1)在超声波水浴条件下，在固相合成树脂上偶联Fmoc保护α‑氨基的Gly；(2)在超声波水浴条件下，脱除Fmoc保护基，然后按照偶联Fmoc或Boc保护α氨基的氨基酸，然后脱除Fmoc保护基的方法依次进行偶联；(3)在超声波水浴的条件下，脱除Lys(Alloc)中的Alloc保护基；(4)在超声波水浴的条件下，偶联Fmoc‑AEEA‑OH，然后以脱除Fmoc保护基然后偶联的方法依次偶联Fmoc‑AEEA‑OH、Fmoc‑Glu‑OtBu和十八烷二酸单叔丁酯；(5)裂解树脂和侧链保护基得到粗肽；(6)纯化。本发明工艺简单、合成周期短、效果好、收率高，解决了司美格鲁肽本身序列由于β‑折叠造成的残基固相偶联困难、收率较低的问题。

技术领域

本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种GLP-1类似物司美格鲁肽的合成方法，具体为一种超声波快速合成司美格鲁肽的方法。

背景技术

司美格鲁肽是由诺和诺德公司研发的长效GLP-1类似物，该药物首先批准上市的是注射剂，只需要进行每周一次的皮下注射给药。2019年，FDA批准口服司美格鲁肽上市，作为首款口服的GLP-1类似物糖尿病药物，该药的市场前景被广泛看好。

从结构上看，司美格鲁肽需要将20位Lys接上两个AEEA、γ-谷氨酸和十八烷二酸脂肪链，其中2位采用非天然氨基酸氨基异丁酸。与利拉鲁肽相比，司美格鲁肽的脂肪链更长，疏水性增加，但是司美格鲁肽经过短链的PEG修饰，亲水性大大增强。PEG修饰后不但可以与白蛋白紧密结合，掩盖DPP-4酶水解位点，还能降低肾排泄，可延长生物半衰期，达到长循环的效果。司美格鲁肽的序列结构如下：

H-His¹-Aib²-Glu³-Gly⁴-Thr⁵-Phe⁶-Thr⁷-Ser⁸-Asp⁹-Val¹⁰-Ser¹¹-Ser¹²-Tyr¹³-Leu¹⁴-Glu¹⁵-Gly¹⁶-Gln¹⁷-Ala¹⁸-Ala¹⁹-Lys²⁰(AEEA-AEEA-γ-Glu-Octadecanedioic)-Glu²¹-Phe²²-Ile²³-Ala²⁴-Trp²⁵-Leu²⁶-Val²⁷-Arg²⁸-Gly²⁹-Arg³⁰-Gly³¹-OH

司美格鲁肽现有的合成工艺，包括原研选择的生物发酵结合化学合成的方法完成产品的制备方法(CN101910193)。采用此方法合成，生物发酵方法制备GLP-1(11-37)片段之后，N-末端氨基和Ser、Thr和Tyr侧链的羟基均没有进行保护，直接和侧链的OSu酯进行反应，容易导致多位点的反应，形成大量非预期的杂质，不利于后期的分离纯化，收率也比较低。

司美格鲁肽现有的合成工艺，还包括一些传统的多肽固相合成以及片段缩合的合成方法(CN 103848910、CN 106928343、CN106478806、WO2016046753等)。采用这些方法进行司美格鲁肽的合成，基本上在实际应用上没有考虑司美格鲁肽本身的肽序结构和特点，比如多肽二级结构对于多肽固相合成的影响，氨基酸侧链保护基团对于多肽固相偶联的影响，侧链较长脂肪链疏水性对于多肽固相合成的影响、偶联副反应对于产品收率的影响、片段缩合片段的溶解性和缩合难以程度等等。