[发明专利]一种猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清及其制备方法

说明书

本发明涉及一种猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清及其制备方法。所述血清主要用于兽用生物制品的质量控制，该血清的制备包括猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫原的制备、阴性试验动物的筛选、免疫及抗体水平监测及阳性血清检定。采用本发明制备的阳性血清纯净性好，无菌、无支原体、无外源病毒污染；特异性好，不含有除猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体外的其他猪常见病原抗体，中和效价高≥1:32。以上特征充分满足了外源病毒检验用阳性血清的要求，解决了长期困扰兽用生物制品行业猪繁殖与呼吸综合征活疫苗质量控制缺少标准阳性血清的瓶颈问题，对于提升我国猪繁殖与呼吸综合征活疫苗质量和猪繁殖与呼吸综合征疫病防控水平具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清及其制备方法，属于生物技术和动物病毒学领域。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)，俗称“猪蓝耳病”，是一种引起母猪繁殖障碍及新生仔猪呼吸道症状和高死亡率的急性、高度传染性的疾病。该病在上个世纪80、90年代，曾在世界范围内流行和传播，给养猪业常造成严重经济损失。郭宝清等1996首次从国内疑似PRRS感染猪群中分离出PRRSV(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus)，从而证实了本病在我国的存在。随后各地相继发生流行性感染，特别是2006年，高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的出现，给我国养猪业带来了近乎毁灭般的打击。直到现在，该病仍是严重威胁我国养猪业发展的重要传染病之一。

目前我国蓝耳病以预防为主，猪繁殖与呼吸综合征病毒活疫苗和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒活疫苗应用广泛。在兽用生物制品制造的过程中，因需要采用多种生物性原材料，如血清、胰酶、细胞等，极易受到外源因子的污染。而所污染的外源因子的不确定性给检验带来极大的困难。目前按照现行《中国兽药典》的规定，猪繁殖与呼吸综合征病毒活疫苗和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒活疫苗需进行外源病毒检验。检验时应采用特异性血清对疫苗毒进行中和。PRRSV是典型的抗体依赖性的病毒，病毒的存在会对抗体的产生起到抑制作用，所以机体不易产生高效价的抗体，且抗体的存在也不能完全抑制病毒的增殖。在外源病毒检验过程中，低效价的猪繁殖与呼吸综合征病毒血清不能完全中和疫苗毒及种毒，且生产企业自行制备的血清存在特异性差、效价低、血清对细胞毒性大、外源因子污染等问题，严重影响了产品质量检验。

目前，已有一种采用兔体进行猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清制备的方法，制备的血清效价为1:16以上，用于毒种的鉴别检验，中和效价达不到外源病毒检验用病毒中和的目的，且兔血清往往对细胞毒性较大，不适合细胞培养试验用(专利申请号201210449829.0)。目前尚未见有采用经剖腹产且不吃母乳的猪(CDCD猪)免疫，浓缩抗原作为免疫原，制备出能保证良好纯净性和特异性且高效价的专门用于疫苗质量控制的猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清制备的报道。本发明提供了一种针对猪繁殖与呼吸综合征病毒高效价、成分单一、纯净良好的特异性阳性血清的制备工艺，该工艺制备的阳性血清充分满足了外源病毒检验对检验试剂的要求，解决了长期困扰高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗和猪繁殖与呼吸综合征活疫苗质量控制的瓶颈问题，对于兽用生物制品行业的健康发展具有重要意义。

发明内容

本发明为解决兽用生物制品标准物质短缺问题，提供了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清制备工艺。采用该工艺制备的阳性血清中和效价高，能解决目前兽用生物制品外源病毒检验时猪繁殖与呼吸综合征活疫苗中和不完全的问题；纯净性好，不含有其他猪常见病原；特异性好，不含有除猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体外的其他猪常见病原抗体。以上特征充分满足了外源病毒检验对阳性血清的要求，解决了长期困扰猪繁殖与呼吸综合征活疫苗质量控制的瓶颈问题，对于兽用生物制品行业的健康发展具有重要意义。

为实现上述目标，本发明实施了以下技术方案：