[发明专利]一种检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒及其检测方法和用途

权利要求书

1.一种检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，包括包被抗原蛋白溶液的包被板，所述抗原蛋白为如下a或b或c：

a)SEQ ID NO.2序列所示的蛋白质；

b)在SEQ ID NO.2序列所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；

c)将a)或b)所示蛋白质的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由SEQ ID NO.2序列衍生的蛋白质；

包被的所述抗原蛋白为invA蛋白，沙门氏菌invA重组蛋白的制备如下：表达沙门氏菌invA重组蛋白的重组载体构建，将回收的invA片段与pET28a载体用NdeI/XhoI进行双酶切，酶切条件为37℃作用1.5h；沙门氏菌invA重组蛋白的表达及纯化；

从LB培养平板上挑取大肠埃希氏杆菌BL21(E.coli BL21)单菌落，转接于含LB培养液的试管中，37℃培养过夜，制备菌液；将菌液转接到250mL的LB培养基中，接种量为2％，培养6h；8000r/min离心10min；将菌体溶于50mL PBS；将溶解的菌液解冻，超声波裂解；置8000r/min，离心10min，收集上清；用BCA蛋白含量检测试剂盒测定蛋白含量；然后将破碎菌液用0.01M、pH＝7.2的PBS稀释至总蛋白含量为1mg/mL；即为样品稀释液；

还包括酶标抗体、显色液、终止液、阳性血清和阴性血清；

所述酶标抗体为HRP兔抗鸡IgG，稀释倍数为1∶10000；

所述抗原蛋白溶液的包被浓度如下：100μL/孔、抗原蛋白溶液浓度为10μg/mL。

2.根据权利要求1所述的检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒，其特征在于：所述阳性血清为通过沙门氏菌攻毒SPF鸡后的血清；阴性血清为SPF鸡血清。

3.根据权利要求2所述的检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒，其特征在于：所述显色液为TMB，所述终止液为2mol/L的H₂SO₄。

4.权利要求1-3任一所述试剂盒在制备检测待测样本是否感染沙门氏菌产品中的应用；

或，权利要求1-3任一所述试剂盒在制备检测待测样本是否含有沙门氏菌抗体产品中的应用；

或，权利要求1中的所述抗原蛋白在制备检测待测样本是否感染沙门氏菌产品中的应用；

或，权利要求1中所述抗原蛋白在制备检测待测样本是否含有沙门氏菌抗体产品中的应用。