[发明专利]槟榔芋软腐病的生防细菌筛选方法

说明书

本发明提供槟榔芋软腐病的生防细菌筛选方法，涉及病害防治技术领域。该槟榔芋软腐病的生防细菌筛选方法，包括以下步骤：S1、准备材料以及培养基；S2、细菌的分离和保存；S3、生防细菌的离体球茎筛选；S4、平板拮抗实验；S5、菌株16SrDNA分子鉴定；S6、菌株形态观察及主要生理生化特征；S7、生防细菌的田间活体防效试验。本发明，通过从健康槟榔芋的根系土壤中筛选纯化出53株细菌菌株，其中对致病菌具有生防作用的菌株4株，为后期槟榔芋软腐病的防治和生防菌株的开发利用提供研究基础和实验材料，减少槟榔芋生产上的经济损失。

技术领域

本发明涉及病害防治技术领域，具体为槟榔芋软腐病的生防细菌筛选方法。

背景技术

槟榔芋是天南星科芋属，属多年生草本植物，营养丰富口感佳且有较高市场价值。2011年11月22日，中华人民共和国农业部批准对“福鼎槟榔芋”实施农产品地理标志登记保护。

槟榔芋软腐病的病原为胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜软腐致病型，属细菌。此病菌也是引起其近缘物种芋头、魔芋等的主要致病菌。该致病菌主要危害地下球茎，在发病初期，患病植株外形特征与健康植株无明显差异，而球茎内部中心组织则表现出软化腐烂，球茎拔起时易断，腐烂处产生坏鸡蛋的恶臭。若没及时发现，从球茎由内向外扩展腐烂，直至全株枯萎，该病发展迅速，是一种毁灭性病害，对槟榔芋产量和当地经济影响巨大。而此病用轮作、施农药等方式防治成效甚微、且作用时间短，还易产生生态和食品的安全问题。

研究表明，利用植株上附生的或根际土壤中的拮抗细菌或其代谢产物调控根围有害微生物的平衡可以达到控病保产的目的，是土传病害防治的重要途径。故筛选植株上附生的或根际土壤中的生防细菌，将其应用于农业种植在研究软腐病的防治上具有积极的实践意义。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了槟榔芋软腐病的生防细菌筛选方法，解决了现有技术中存在的缺陷与不足。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：槟榔芋软腐病的生防细菌筛选方法，所述方法包括以下步骤：

1.槟榔芋软腐病的生防细菌筛选方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

S1、准备样品以及培养基

准备土样，其中土样取深度为10-15cm的健康槟榔芋植株根际土壤，带回备用，培养基为NA培养基；

S2、细菌的分离和保存

土样分离、纯化细菌：

称取10g土壤放入盛有90mL无菌水并带有20颗玻璃珠的150mL三角瓶中，振荡10min，即稀释度为10^-1的土壤悬浮液，吸取1mL的10^-1土壤悬浮液放入盛有9mL无菌蒸馏水的试管中，充分混匀，以此类推，再稀释成10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7、10^-8的稀释液，分别吸取上述稀释液100μL均匀涂于NA培养基平板上，每个稀释度涂布3皿，于37℃恒温培养箱倒置培养24-48h；

待长出菌落后，根据平板上长出菌落的形态颜色、质地等性状挑取不同的单菌落，纯化后接斜面试管4℃保存备用；

S3、生防细菌的离体球茎筛选