[发明专利]一种具有单碱基分辨率的核酸修饰检测方法有效
| 申请号： | 202011034485.8 | 申请日： | 2020-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN112662749B | 公开（公告）日： | 2023-05-12 |
| 发明（设计）人： | 骆观正;陈丽倩;张璋;陈鸿萱 | 申请（专利权）人： | 中山大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 赵崇杨 |
| 地址： | 510260 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 具有 碱基 分辨率 核酸 修饰 检测 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种具有单碱基分辨率的核酸修饰检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.利用特异性结合N6-甲基化修饰碱基的6mA抗体免疫沉淀待测核酸样本，在6mA抗体的结合下修饰的碱基会促进碱基翻转的发生，进一步形成错配结构；
S2.在步骤S1免疫沉淀后的体系中添加特异性识别错配结构的核酸酶进行酶切反应；或将步骤S1免疫沉淀后的体系进行高锰酸钾氧化处理，洗脱、纯化，添加哌啶对纯化产物进行特异切割；
S3.将步骤S2的酶切产物或特异切割产物进行电泳检测，若产生特异切割的条带，则判断待测核酸样本中存在该修饰碱基；反之则不存在该修饰碱基；
所述核酸样本为双链DNA；
所述核酸酶选自T7E1内切酶、MBN内切酶或lambda外切酶中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的核酸修饰检测方法，其特征在于，在步骤S2酶切反应后，还包括构建核酸文库以及测序的步骤。
3.根据权利要求1所述的核酸修饰检测方法，其特征在于，所述哌啶浓度为10%。
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