[发明专利]一种拉萨小檗细胞培养中高产细胞系筛选、增殖的方法在审
| 申请号： | 202011039489.5 | 申请日： | 2020-09-28 |
| 公开（公告）号： | CN112175897A | 公开（公告）日： | 2021-01-05 |
| 发明（设计）人： | 林良科;王旭东 | 申请（专利权）人： | 四川协力制药股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 成都创新引擎知识产权代理有限公司 51249 | 代理人： | 柴越 |
| 地址： | 610000 四川省成*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 拉萨 细胞培养 高产 细胞系 筛选 增殖 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种拉萨小檗细胞培养中高产细胞系筛选、增殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、挑选培养14～21d的拉萨小檗胚性愈伤组织为培养材料；
B、将拉萨小檗胚性愈伤组织分成直径0.5cm的小区块接种于相同继代培养基上培养；
C、将步骤B培养18d的小区块中选择最鲜黄的愈伤组织，一半用来检测分析，另一半继续继代的在培养基中培养；
D、每18d继代筛选测定一次，如此不断地反复筛选、继代、扩大、测定，连续培养30代，最后得到生长速度快，小檗碱合成能力强的高产细胞系；
E、将选择出的稳定高产细胞系接种在增殖培养基上暗培养，扩大高产细胞系数量。
2.根据权利要求1所述一种拉萨小檗细胞培养中高产细胞系筛选、增殖的方法，其特征在于，在步骤E中，所述增殖培养基为MS培养基、6-BA0.1～0.3mg/L、NAA0.5～0.9mg/L、香蕉泥20-60g/L、琼脂5.5g/L、蔗糖20g/L，pH为5.8。
3.根据权利要求1所述一种拉萨小檗细胞培养中高产细胞系筛选、增殖的方法，其特征在于，在步骤E中，所述培养条件为每天24h遮光，培养时间为14～20d，培养条件为温度23～26℃、相对湿度为85％。
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